常规石蜡包埋制作小血管光镜切片的方法和效果

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常规石蜡包埋制作小血管光镜切片的方法和效

果

小血管因其体积微小、组织薄弱，按照常规的石蜡包埋方法，在脱水透明浸蜡等过程中，由于

器械夹持、加热等因素，很容易塌陷变形甚至损坏，最终得不到管腔较为规则和完整的血管光

镜切片。为了解决这一困难，该研究采用琼脂预先包埋小血管再进行常规石蜡包埋制作光镜切

片的方法和效果，并与单纯石蜡包埋法得到的结果进行了比较，现报道如下。

1 、材料与方法

1 ．1 材料与试剂以 4% 多聚甲醛固定好的昆明鼠胸主动脉为例，其血管管径约 1 mm，长度约

1. 3cm ，见图 1 。普通琼脂粉，规格为 1 ml 的一次性普通医用注射器，眼科剪，眼科镊，大头

针，常规脱水包埋及 HE 染色所用试剂等。

1 ．2 操作步骤

1 ．2 ．1 小血管预处理将固定好的小血管分割成 0. 5 ～1. 0 cm 若干段，或根据需要选择包埋

长度。为了便于观察血管的位置，预先用伊红将血管染红。

1 ．2 ．2 琼脂预包埋准备 1 ml 注射器，切去注射器乳头靠后部分。将普通琼脂粉预先配成 1.

5% 琼脂粉悬浊液，再放入微波炉中低火加热至 50 ℃左右成液体状态，再将处理过的注射器活

塞往外拉出 1. 5 ～2. 0 ml 距离作为模子，用移液枪将熔化的琼脂液加入注射器前端空缺处，并

迅速将小血管段放入琼脂中，用缝衣针或大头针调整血管在琼脂中的位置，尽量使血管段居

中，并用针尖小心探入血管管腔内，将其塌陷的部分挑起来使管腔成为规则的圆形腔。待琼脂

冷却凝固后，将注射器活塞往前推出获得琼脂柱。

1 ．2 ．3 脱水再包埋包含有血管段的琼脂柱作为一个整体再按照常规的脱水包埋程序做石蜡

包埋。最后一步石蜡包埋时将琼脂柱竖立放于石蜡包埋模子中，并在其周围充满熔化的石蜡，

便于后期切片。

1 ．2 ．4 切片和染色包埋完毕后切片，石蜡切片厚度为 3 μm ，染色采用常规 HE 染色。

2 、结果

琼脂石蜡双包埋法包埋的小血管组织块切片染色后，可观察到管腔完整和规则的血管横断面，

血管内膜等组织结构保存较完好，几乎没有损坏和丢失。而单纯石蜡包埋法包埋的小血管组织

块切片染色后，可观察到血管管壁打折和贴附在一起，变形甚至破裂的现象。

3 、讨论研究

表明琼脂石蜡双埋法在制作一些精细组织的光镜切片上有着很大优势，该研究应用在小血管的

包埋和制片上也证实了这一点。采用琼脂石蜡双包埋法可保持小血管的管腔完整性和规则性，

小血管内膜等组织结构保存较完好，几乎没有损坏和丢失，切片得到较为理想的结果。然而采

用单纯石蜡包埋法包埋的小血管，在脱水包埋等操作过程中，血管的管壁容易贴在一起，且容

易变形甚至破裂，最终得不到令人满意的光镜切片。

琼脂块脱水浸蜡加热之后体积会固缩一半以上，然而为了保证脱水完全，琼脂包埋块又不能过

大，本实验证明课题组自制的 1 ml 注射器琼脂包埋模子较为适合管径为 1 ～3 mm 的小血管包

埋所用，体积大小适中，且可以极为方便的将包埋琼脂块从模子中取出，避免了用器械从其他

类型的琼脂包埋模子中取出琼脂块时，容易将已经包好组织的琼脂块夹烂碰损的情况发生。

包埋所用琼脂浓度不宜过高也不宜过低。高浓度琼脂(3% 以上)，使用相同剂量的脱水剂不能完

全脱水，最终琼脂和石蜡不能很好的融合在一起，无法正常切片，推测原因可能是琼脂液密度

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摘要：

常规石蜡包埋制作小血管光镜切片的方法和效果小血管因其体积微小、组织薄弱，按照常规的石蜡包埋方法，在脱水透明浸蜡等过程中，由于器械夹持、加热等因素，很容易塌陷变形甚至损坏，最终得不到管腔较为规则和完整的血管光镜切片。为了解决这一困难，该研究采用琼脂预先包埋小血管再进行常规石蜡包埋制作光镜切片的方法和效果，并与单纯石蜡包埋法得到的结果进行了比较，现报道如下。1、材料与方法1．1材料与试剂以4%多聚甲醛固定好的昆明鼠胸主动脉为例，其血管管径约1mm，长度约1.3cm，见图1。普通琼脂粉，规格为1ml的一次性普通医用注射器，眼科剪，眼科镊，大头针，常规脱水包埋及HE染色所用试剂等。1．2操作步骤1．2...

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