改良M199培养基培养Vero细胞及狂犬病病毒的效果

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改良 M199 培养基培养 Vero 细胞及狂犬病病毒

的效果

来源：学术堂作者：周老师

发布于：2014-05-19 共2560 字

199 培养基是 Morgan 等于 1950 年开发的培养基，其广泛应用于各类细胞的培养及相关病毒性

疫苗的研发生产。Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的用于疫苗生产的细胞

系。与其他细胞基质相比，Vero 细胞来源方便，无外源因子污染，对多种病毒敏感，病毒增殖

滴度较高，是很多病毒的理想培养基质，广泛应用于人和动物疫苗的生产。

Vero 细胞的生长状态直接影响相关病毒性疫苗的生产效率和疫苗质量，因此，培养基的筛选显

得尤为重要。

本研究使用的改良 M199 培养基是以 Gibco M199 培养基为基础，通过调整氨基酸等营养成分的

配比而制成的培养基。本实验通过比较改良 M199 培养基和进口 M199 培养基培养 Vero 细胞及

狂犬病病毒的效果，以期获得更适应 Vero 细胞高密度培养的培养基。

1 材料与方法

1. 1 细胞及病毒 Vero 细胞及狂犬病病毒 aG 株均由长春生物制品研究所有限责任公司提供。

1. 2 实验动物 SPF 级昆明小鼠，雌性，55 日龄，体重 11 ～18 g，由长春生物制品研究所有限

责任公司实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（吉）2011-0003 。

1. 3 主要试剂改良 M199 培养基由无锡市美迪生物制品有限公司提供；进口 M199 培养基由国

外某公司提供；胰酶购自美国 Gibco 公司；新生牛血清购自武汉三利生物技术有限公司。

1. 4 细胞培养及形态观察取已长满单层的 Vero 细胞，加入 0. 25% 胰酶消化，按 1 6 ∶传代，

以6 ×104 个／ ml 的密度接种于新的 T25 细胞培养瓶中，分别用含 5% 新生牛血清的改良

M199 培养基和进口 M199 培养基，置 37 ℃ 恒温培养箱中静止培养。每隔 24 h 于倒置显微镜

下观察细胞的生长状态。

1. 5 细胞计数与活力测定细胞长成致密单层时，消化计数，共计数 3 次，取平均值；同时采用

台盼蓝染色法测定细胞活力。细胞活力（%）= 活细胞数／（活细胞数 + 死细胞数）×100%1.

6 病毒接种及培养细胞长成致密单层后，弃去培养液，分别加入含 1% 新生牛生血清的改良

M199 培养基和进口 M199 培养基，再分别按 0. 1 MOI 接种狂犬病病毒 aG 株，置 33 ℃恒温孵

箱中静止培养。

1. 7 病毒滴度的测定病毒接种 48 h 后，每隔 12 h 采样，每隔 3 d 更换 1 次维持液。按照《中国

药典》三部（2010 版）规定，采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病病毒滴度。

2 结果

2. 1 不同M199 培养基培养的 Vero 细胞的形态倒置显微镜下观察可见，使用改良 M199 培养基

培养的 Vero 细胞较进口 M199 培养基培养的 Vero 细胞形态更规则，皱缩死细胞也相对较少，

见图 1 。

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摘要：

改良M199培养基培养Vero细胞及狂犬病病毒的效果来源：学术堂作者：周老师发布于：2014-05-19共2560字199培养基是Morgan等于1950年开发的培养基，其广泛应用于各类细胞的培养及相关病毒性疫苗的研发生产。Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的用于疫苗生产的细胞系。与其他细胞基质相比，Vero细胞来源方便，无外源因子污染，对多种病毒敏感，病毒增殖滴度较高，是很多病毒的理想培养基质，广泛应用于人和动物疫苗的生产。Vero细胞的生长状态直接影响相关病毒性疫苗的生产效率和疫苗质量，因此，培养基的筛选显得尤为重要。本研究使用的改良M199培养基是以GibcoM199培养基...

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