对我国荷斯坦牛乳腺不同发育阶段乳腺内大分子成分变化分析
对我国荷斯坦牛乳腺不同发育阶段乳腺内大分
子成分变化分析
来源：学术堂 作者：姚老师
发布于：2014-05-15 共4972 字
乳腺发育过程涉及许多种细胞的参与及协同作用。乳腺细胞内大分子成分主要有糖类、脂类和
蛋白质等三大类，它们也是乳汁主要组成成分。乳汁是乳腺生理活动的产物，乳汁中含有初生
幼仔生长发育所必需的营养物质。乳汁成分复杂，都含有水、蛋白质、脂肪、糖、无机盐等。
季节、年龄、胎次、泌乳期、个体特性等，都能影响乳汁成分。乳中的蛋白质主要包括 3类，
即酪蛋白、乳清蛋白和微量蛋白。它们除能供给机体营养，还具有保护、物质运输、控制代
谢、输送氧气、防御病菌的侵袭、传递遗传信息等功能。乳中脂类主要是三酰甘油，约占乳脂
的98%。乳中无机盐有主要包括钠、钾、钙、镁的氯化物，磷酸盐、铁等。这些物质在乳中的
含量有很大差异，在体内都各自具有特殊的生理功能，缺乏时常引起特殊疾病。
本研究采用经典组织化学方法结合生物显微图像分析软件，系统地对不同发育时期中国荷斯坦
牛乳腺中大分子成分变化进行分析，可有效提高乳产量和质量。为进一步研究中国荷斯坦牛的
泌乳机制及其泌乳机能分化规律和选育优良性状提供形态学资料与理论依据。
1材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物
试验动物来自于黑龙江省（国家级）畜牧业科技园区。选取健康雌性中国荷斯坦牛 30 头。检
测无乳腺炎及其他疾病。采样时点为：青春期 360、420d；妊娠期 60、180、260d；泌乳期
7、60、280d；退化期 3、30d，共计 10 个时点。每个采样时点选取 3只奶牛作平行，每次试验
至少重复3次。奶牛处死后，用灭菌手术刀分离乳腺组织，立即置于10%甲醛水溶液固定备
用。
1.1.2 样品采集与制备
乳腺组织采集后，迅速转入冻存管中，液氮冻存后转入-80℃冰箱备用。将固定好的各时期组
织块修整标号后，用流水冲洗后，乙醇梯度脱水，丙酮、二甲苯透明；56℃蜡箱浸蜡，石蜡包
埋，修块；切片（4~5μm）、展片、粘片、烘干备用。
1.2 方法
1.2.1 过碘酸-Schiff 反应（PAS）显示乳腺中糖类的变化
将标记好的乳腺组织冰冻切片用过碘酸水溶液处理；染色、漂洗、复染、梯度脱水、封片。显
微镜观察、照像。对照片不经过碘酸处理，直接进入染色流程，则反应呈阴性或明显减弱。
1.2.2 油红O染色法显示乳腺中脂类的变化
取标记好的乳腺组织冰冻切片固定、漂洗、油红O染液浸染、复染、封片。显微镜观察、照
像。
1.2.3 茚三酮-Schiff 反应显示乳腺中蛋白质的变化
将标记好的乳腺组织冰冻切片固定、置入 0.5%茚三酮液中处理、切片取出后流水冲洗、染
色、漂洗、冲洗、复染、1%盐酸酒精分化流水冲洗、梯度脱水、封片。显微镜观察、照像。
对照片不经茚三酮液处理，直接进入Schiff 试剂染色流程，则反应呈阴性或明显减弱。
1.2.4 图像采集、处理与分析
本研究应用LeicaDLMB-2 显微镜观察、照像，每个重复3次，每张切片选取 5个视野观察，最
后用Image-proplus6.0 软件对采集的图像进行处理与分析。
2、结果与分析
2.1 过碘酸-Schiff 反应（PAS）显示乳腺中糖类的变化
青春期中国荷斯坦牛乳腺内分布许多导管，紫色信号大都分布在导管周围的结缔组织中，此时
乳腺内糖类主要为糖蛋白和蛋白聚糖（见图1a，图 1b）。妊娠 60 日，PAS 阳性信号大多出现
在腺泡间的结缔组织中，但腺泡和小叶间结缔组织明显变薄（见图1c）。妊娠 180 日，PAS 阳
性仍主要出现在结缔组织中，腺泡腔内阳性信号很难判断（见图1d）。妊娠 260 日，整个腺泡
腔因为分泌物的增加而膨胀变大，腺泡腔部分内容物呈现紫色的PAS 阳性反应。小叶间结缔组
织中阳性信号明显，但面积逐步减少（见图1e，图 1f）。泌乳期乳腺的发育分化完全，腺泡上
皮细胞分泌特征明显，腺体的大部分都是充盈饱满的腺泡腔（见图1g，图 1h）。腺泡腔中内
容物的 PAS 阳性信号非常强（见图1i，图 1j）。乳腺进入退化期，腺泡上皮细胞逐渐凋亡，其
泌乳活动也逐步停止。退化 3日，逐渐萎缩的腺泡腔内还可见明显减弱的PAS 阳性信号，结缔
组织中阳性信号逐步增强（见图1k）。退化 30 日，只有小部分残留的腺泡腔内还可见较弱的
PAS 阳性信号，腺泡腔内主要为大的脂肪颗粒，结缔组织中阳性信号进一步增强扩大，PAS 阳
性信号大多分布在乳腺间质中（见图1l）。
摘要：
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对我国荷斯坦牛乳腺不同发育阶段乳腺内大分子成分变化分析来源：学术堂作者：姚老师发布于：2014-05-15共4972字乳腺发育过程涉及许多种细胞的参与及协同作用。乳腺细胞内大分子成分主要有糖类、脂类和蛋白质等三大类，它们也是乳汁主要组成成分。乳汁是乳腺生理活动的产物，乳汁中含有初生幼仔生长发育所必需的营养物质。乳汁成分复杂，都含有水、蛋白质、脂肪、糖、无机盐等。季节、年龄、胎次、泌乳期、个体特性等，都能影响乳汁成分。乳中的蛋白质主要包括3类，即酪蛋白、乳清蛋白和微量蛋白。它们除能供给机体营养，还具有保护、物质运输、控制代谢、输送氧气、防御病菌的侵袭、传递遗传信息等功能。乳中脂类主要是三酰甘油，...
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