尼古丁及其受体阻断剂对人胚皮肤成纤维细胞增殖的作用
尼古丁及其受体阻断剂对人胚皮肤成纤维细胞
增殖的作用
来源：学术堂 作者：姚老师
发布于：2014-05-20 共4385 字
0 引言
吸烟与很多疾病的发生密切相关，烟草中的尼古丁类有害成分可致皮肤松弛。吸烟引起的皮肤
松弛表现为毛孔突显、面部轮廓变模糊、皮肤松弛下垂等。尼古丁是烟草植物合成的杂环类水
溶性生物碱，俗称烟碱，易透过生物膜和血脑屏障而使人成瘾。
人体通过口鼻和支气管黏膜吸收尼古丁后，会出现如心跳加速、呼吸变快、血压升高、精神状
况改变等症状。尼古丁的半衰期约为 2h。
尼古丁是乙酰胆碱受体激动剂，经尼古丁型乙酰胆碱受体(nAChR)介导而发挥作用。nAChR 是
一种相对分子质量为 290kDa 的蛋白质，最初发现表达于神经肌肉间突触;深入研究表明，整个
外周和中枢神经系统以及非神经细胞均表达 nAChR。nAChR 具有一个特征性的同五聚体环结
构跨膜区，环结构的中心为离子通道。已发现 αl～αl0、βl～β4、γ、δ和ε等17 种nAChR 亚单
位，它们的组成差异决定离子通道的功能。其中，αl0 亚单位不能单独形成功能受体，当其与
α9 组成型受体共同作用时，可产生强大的乙酰胆碱激发电流，表明 αl0 亚基可调节 α9 亚基型
受体的生理学特性，两种亚单位共同组成一个功能型受体。电生理学与免疫组化研究表明，人
类神经纤维表达的 nAChR 主要由 α3、α5 或β4 亚基的同五聚体组成。据报道，尼古丁可能通
过激活 α7 胆碱受体而发挥保护神经的作用。此外，nAChR 的表达并不局限于神经末梢，研究
发现皮肤组织也表达 nAChR 和毒覃碱型乙酰胆碱受体(mAChR);人胚皮肤成纤维细胞(Human
Embryonic Fibroblast，hEF)表达特异性 nAChR。
皮肤松弛是常见的皮肤衰老现象，可由自然因素和/或非自然因素引起。大量研究证实，皮肤
松弛始于皮肤真皮的成纤维细胞特有的生物学特性改变;皮肤皱褶、皮肤变薄与真皮成纤维细
胞生长异常密切相关。皮肤老化程度与吸烟量及吸烟持续时间正相关。尼古丁能改变成纤维细
胞的组织重塑功能及 nAChRs 的结构和功能，从而引起皮肤细胞外基质中特定成分减少。香烟
烟雾提取物和尼古丁对 hEF 的损伤效应的研究结果表明，香烟烟雾提取物可致 hEF 呈典型的损
伤细胞形态，并抑制细胞生长和诱导细胞 G1、G2 期停滞;但是，微量尼古丁(低于1mmol/L)则
可促进培养的hEF 增殖。所以，目前尼古丁对 hEF 增殖的作用尚未明确。
hupo 胆碱是尼古丁受体阻断剂，它能与尼古丁受体结合而使尼古丁丧失对nAChR 的刺激效
应，是一种除极性肌松药，hupo 胆碱可阻断神经细胞中 nAChR 表达而用作止痛药和麻醉辅助
剂。由琥珀酰氯和氯化胆碱在一定条件下反应制取的氯化hupo 胆碱
(SuccinylcholineChloride，SC)注射液是医学上常用的一种骨骼肌松弛剂。然而，尚未证明 SC
能阻断皮肤中 nAChR 的表达而缓解尼古丁的皮肤损伤作用。
———本研究经分别分析尼古丁及其受体阻断剂氯化hupo 胆碱对人胚皮肤成纤维细胞增殖的
影响，旨在发现吸烟对皮肤成纤维细胞的损伤效应及氯化hupo 胆碱的潜在效能，为深入研究
氯化hupo 胆碱的皮肤保护效应及其美容功效提供实验依据。
1、材料与方法
1．1细胞培养
采用补充 10%新生牛血清的DMEM 培养基培养 hEF(细胞株取自医学遗传学国家重点实验室)，
胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞、以 10000 个/100μL 接种96 孔板，分别加入不同浓度
的尼古丁和氯化hupo 胆碱培养。
1．2细胞增殖分析
本研究采用的噻唑蓝(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT)比色
法是常用的检测细胞存活的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性
MTT 还原为非水溶性的蓝紫色结晶甲�H(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二
甲基亚砜(DimethylSulfoxide，DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在 490nm 波长
处测定其吸光度，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞
数成正比。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细
胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，具有灵敏度高、经济适用等特点。
细胞种板后，设置正常生长的细胞为对照组，其余组按浓度添加:尼古丁(昆明伊普瑞斯科技有
限公司)(共8个浓度):10－8、10－7、10－6、10－5、10－4、10－3、10－2和10－1mol/
L;SC(上海旭东海普药业有限公司)(共8个浓度):10－8、10－7、10－6、10－5、10－4、10－
3、10－2和10－1mol/L;10－3mol/L 尼古丁和 SC(共5个浓度):10－6、10－5、10－4、10－3和
10－2mol/L;10－7mol/L 尼古丁和 SC(共5个浓度):10－6、10－5、10－4、10－3和10－2mol/L;
继续培养 24h。吸除每孔液体并用磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSolution，PBS)洗细胞一遍，
再加入 100μLPBS 和20μL0．5%MTT 溶液，作用 4h。吸除每孔液体，各加入 150μLDMSO，震
荡混匀 10min。以对照组调零测 A490;计算细胞存活率(实验组A值/对照组A值)。
1．3数据分析设置平行组，重复 6次，计量资料以平均值±标准差(x－±SD)表示。
2、结果
2．1尼古丁对皮肤成纤维细胞增殖的影响与对照组比较，hEF 在10－8～10－6mol/L 尼古丁作
用下，存活率升高，说明该浓度尼古丁对 hEF 增殖具有促进作用;10－5～10－1mol/L 尼古丁作
用下，存活率明显降低，说明该浓度尼古丁对 hEF 增殖具有抑制作用(见图1)。
2．2氯化hupo 胆碱对皮肤成纤维细胞增殖的影响仅 10－8mol/LSC 作用后 hEF 存活率远低于对
照组存活率，其余浓度SC 作用后细胞存活率均与对照组无显著差异。说明10－8mol/LSC 对
hEF 增殖具有抑制作用;10－7～10－1mol/LSC 对hEF 增殖的影响不明显，仅呈现随着浓度增高
其细胞增殖的促进作用增强的趋势(见图2)。
摘要：
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尼古丁及其受体阻断剂对人胚皮肤成纤维细胞增殖的作用来源：学术堂作者：姚老师发布于：2014-05-20共4385字0引言吸烟与很多疾病的发生密切相关，烟草中的尼古丁类有害成分可致皮肤松弛。吸烟引起的皮肤松弛表现为毛孔突显、面部轮廓变模糊、皮肤松弛下垂等。尼古丁是烟草植物合成的杂环类水溶性生物碱，俗称烟碱，易透过生物膜和血脑屏障而使成瘾。人体通过口鼻和支气管黏膜吸收尼古丁后，会出现如心跳加速、呼吸变快、血压升高、精神状况改变等症状。尼古丁的半衰期约为2h。尼古丁是乙酰胆碱受体激动剂，经尼古丁型乙酰胆碱受体(nAChR)介导而发挥作用。nAChR是一种相对分子质量为290kDa的蛋白质，最初发现表...
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