太白银莲花皂苷B对人类胶质瘤细胞的生长影响

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太白银莲花皂苷 B对人类胶质瘤细胞的生长影

响

来源：学术堂作者：姚老师

发布于：2014-08-29 共3094 字

前言

神经胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤，其发病率占全部颅内肿瘤的 40 %，我国每

年新查出此病患者为约为 10 万人。虽然胶质瘤的发生率(3/105)比大多数其它肿瘤的发生率低,

但因为它的无限增殖能力和侵袭性生长直接危及瘤体周围的很多重要的生命调节中枢以及对目

前各种治疗不敏感, 在肿瘤周围 2 cm 以内的脑组织中均可能有肿瘤细胞生长，所以预后比任何

其他系统的肿瘤要差得多，发病率高，预后差，尽管经过积极的外科手术治疗和化疗，其中位

生存时间仍然不超过一年时间，给患者和患者家属及社会带来了沉重的医疗和精神负担，鉴于

此，寻找新型抗肿瘤药物具有十分重要的深远意义。太白银莲花（Anemone taipaiensis）为毛

莨科，银莲花属，产自我国陕西秦岭，生长于海拔 2900-3700 米间山地草坡或多石砾处。太白

银莲花皂苷 B 是第一次从太白银莲花中经过系统化学分析和分离鉴定的皂苷之一，所以它的生

物学效应目前仍然不清楚，在这篇文章中我们第一次研究了太白银莲花皂苷 B对人类胶质瘤细

胞的生长影响，探索其对人胶质瘤细胞的生长抑制和促凋亡作用，为临床药物治疗恶性胶质瘤

开拓了广阔的前景。

1 、材料与方法

1.1 细胞系和试剂

人源性胶质瘤细胞系 U87MG、U251MG、ECV304 （人脐静脉内皮细胞）购买于美国 ATCC 公

司，太白银莲花皂苷 B（分子式：C70H114O34，分子量：1498）纯品由第四军医大学药剂科

汤海峰教授提供。分子结构为3β-O- {β-D-xylopyranosyl- (1→3)-α-L-rhamnopyranosyl- (1 →2)-

[β-D-glucopyranosyl- (1 →4)]-α-L-arabinopyranosyl} oleanolic acid 28-O- { α-L-rhamnopyra-nosyl-

(1 →4)-β-D-glucopyranosyl- (1 →6)-β-D-glucopyranoside},高效液相色谱法(HPLC)分析其纯度大

于95 % （图1 ）。纯品溶解于DMSO, 母液储存于 -20 ℃ 冰箱，浓度为500 μg/mL，实验前取出

稀释至工作浓度分装备用，分装液储存于 -4 ℃ 冰箱，各实验组太白银莲花皂苷 B 工作液中含

DMSO 浓度均不超过 1‰(v/v) 以免影响皂苷 B 的生物学作用和胶质瘤细胞的活性。

MTT 购自 Sigma 公司，10 % 胎牛血清、DMSO 溶剂、DMEM 培养基和胰酶均购自 GIBCO 公

司，PBS 购自西安化学试剂厂，96 孔板购自英国CORNING 公司。

1.2 太白银莲花皂苷 B 对U87MG 和U251MG 细胞增殖的影响(MTT 法)

用含10 % 胎牛血清的 DMEM 培养液，在 37 ℃、5 % CO2 培养箱中培养，取对数生长期的

U87MG 和U251MG 细胞，经 0.25 % 胰酶消化后，经过细胞计数后，调整细胞密度为

3×104/mL ，边震荡边种植于96 孔板，每孔体积为 200 μL ，过夜贴壁，将太白银莲花皂苷 B 加

入培养液中配制不同浓度的药物，使其终浓度为0.5，1，2，4，8，16，32，64 μmol/L, 每个浓

度有6 个复孔，对照组为正常培养的细胞中加入 MTT 20 μL，37℃ 孵育 4h，小心弃上清，加

入150 μL DMSO ，空白对照组没有细胞，其他的处理与药物组相同。在 37 ℃、5 % CO2 培养

箱培养 72 h 后，每孔加入 5 mg/ mL 的MTT 20 μL，37 ℃ 孵育 4 h 后，小心吸弃孔内上清，每

孔加入 150 μL DMSO, 震荡 10 min, 使结晶充分溶解，在酶联免疫仪上选择 490 nm 波长测定吸

光度值(OD 值) ，计算 6 孔的平均值。以 OD 值间接计算出72 h 的IC25，IC50，IC75 ，抑制率

=( 对照组OD 值- 用药组 OD 值)/ ( 对照组OD 值- 空白组 OD 值)×100 %。

1.3 荧光显微镜下观察经过 Hoechst 33342 染色后细胞核的形态学变化取对数期生长状态良好的

U87MG 细胞，消化，离心，重悬，计数，调整细胞浓度至 2×104/ mL ，培养于24 孔细胞培养

板，200 μL / 孔，置37 ℃、饱和湿度、5 % CO2 的培养箱中培养。

24 小时后细胞生长贴壁，将细胞分为对照组，处理组，然后加入太白银莲花皂苷 B 工作液

（其终浓度为IC25，IC50，IC75 ），每个浓度有6 个复孔，对照组细胞不作任何处理；置 37

℃、饱和湿度、5 % CO2 的培养箱中继续培养 8 h 和24 h ，在含有10 % 胎牛血清的 DMEM 高

糖培养液的96 孔板中，室温 25 ℃以上，光学显微镜下观察，并采用照相系统进行照相和分

析。接着向 24 孔板中加入 3 μL Hoechst 33342，37 ℃、5% CO2 培养箱中孵育 10 min，在荧光

显微镜下检测细胞核。激发波长350 nm ，发射波长460 nm，逐步进行后荧光显微镜下照相。

2 、结果

2.1 太白银莲花皂苷 B 对人胶质瘤细胞增殖和活性的影响不同浓度的太白银莲花皂苷 B 作用于

U87MG 和U251MG 细胞后，观察 72 h 的细胞生长抑制曲线，可以看出，太白银莲花皂苷 B

对胶质瘤细胞的生长抑制有剂量依赖性效应，能显著抑制细胞的生长，降低生存率。通过生长

抑制曲线计算出太白银莲花皂苷 B 作用于 U87MG 细胞 72 h 的IC25，IC50，IC75 分别为5.2

μmol/L，6.7 μmol/L，8.7 μmol/L，U251MG 的IC25，IC50，IC75 为6.2 μmol/L，7.9

μmol/L，10.5 μmol/L 。皂苷 B 对ECV304 没有显著的生长抑制作用（图2）。

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摘要：

太白银莲花皂苷B对人类胶质瘤细胞的生长影响来源：学术堂作者：姚老师发布于：2014-08-29共3094字前言神经胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤，其发病率占全部颅内肿瘤的40%，我国每年新查出此病患者为约为10万人。虽然胶质瘤的发生率(3/105)比大多数其它肿瘤的发生率低,但因为它的无限增殖能力和侵袭性生长直接危及瘤体周围的很多重要的生命调节中枢以及对目前各种治疗不敏感,在肿瘤周围2cm以内的脑组织中均可能有肿瘤细胞生长，所以预后比任何其他系统的肿瘤要差得多，发病率高，预后差，尽管经过积极的外科手术治疗和化疗，其中位生存时间仍然不超过一年时间，给患者和患者家属及社会带来了沉重的医疗和...

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