微环境诱导iPSC向神经元样细胞分化的能力
微环境诱导 iPSC 向神经元样细胞分化的能力
来源：学术堂 作者：姚老师
发布于：2015-09-25 共4864 字
诱导性多能干细胞 （ induced pluripotent stemcells,iPSC ） 是利用基因工程技术将动物或人的体
细胞重编程而得到的一种类似胚胎干细胞（embryonicstem cells,ESC）的多能干细胞类型[1].本
研究小组前期研究发现，维甲酸能诱导 iPSC 分化成神经细胞，并且能形成功能性的神经元。
但在体内特定微环境下，iPSC 是否可以有效分化为不同类型的神经元和胶质细胞还不清楚。
活体内环境更为复杂，目前还没有 iPSC 移植治疗的成功案例，iPSC 能否在周围细胞和信号分
子的作用下发生定向分化以及移植体内的细胞能否正常存活，尚不明确。
为明确 iPSC 在体内特定微环境诱导下定向分化的能力，本研究利用小鼠的脑组织匀浆上清与
小鼠 iPSC 共培养、小鼠海马脑片与小鼠 iPSC 共培养两种技术来模拟脑内微环境，同时与目前
公认的比较成熟的化学诱导剂全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）的诱导效果相比
较，研究特定微环境诱导 iPSC 向神经元样细胞分化的能力。本研究将为后续 iPSC 用于临床上
神经损伤的治疗提供新的思路和方法，对再生医学的发展有一定意义。
1 材料和方法
1. 1 材料
小鼠 iPSC 购于中科院广州生物医药与健康研究院；MEM、knockout DMEM、神经元基础培养
基KSR、L- 谷氨酰胺的衍生物 GlutaMAXTM 、非必需氨基酸 （ nonessential
aminoacid,NEAA）、β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol）、B27 、重组小鼠白血病抑制因子 （
recombinant mouse leukemia inhibitoryfactor,rmLIF ）均购自 Gibco 公司； ATRA 购自 Sigma 公
司； 马血清（horse serum,HS）、胎牛血清（fatal bovine serum,FBS ）购自 HyClone 公司；
RIPA 裂解液、ECL 发光试剂盒、HRP 标记的山羊抗兔 IgG 及HRP 标记的山羊抗小鼠 IgG 均
购自碧云天生物技术公司； 小鼠抗 GAPDH 单克隆抗体（monocalonalantibody,mAb ） 、兔抗
nestin 多克隆抗体、兔抗胶质纤维酸性蛋白（ glial fibrillary acidic protein,GFAP）多克隆抗体、
小鼠抗微管相关蛋白 2（microtubule-associated protein 2,MAP2）mAb 购自 Abcam 公司； Alexa
Fluor?568 标记的山羊抗小鼠 IgG、Alexa Flour ?488 标记的山羊抗兔 IgG 购自 Moleularprobes 公
司。CO2 培养箱为 Thermo 公司产品。
1. 2 方法
1. 2. 1 iPSC 的培养与处理 复苏小鼠 iPSC, 并接种于经丝裂霉素 C 处理的小鼠胚胎成纤维细胞饲
养层上，加入 iPSC 培养基（ knockout DMEM 、KSR 、100 × GlutaMAX、10 mmol / L
NEAA、10 mmol / L β-mercaptoethanol、100 μg / LrmLIF ）； 37℃ 、50 mL / L CO2 培养箱中培
养。待 iPSC 克隆长满饲养层（一般为 6 ~8 d ），用 1 g/L 的胰蛋白酶消化成单细胞； 将此
iPSC 与饲养层细胞混悬液转移至新的培养皿中，差速贴壁 30 min,以去除剩余的饲养层细胞，
获得富集的iPSC.
摘要：
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微环境诱导iPSC向神经元样细胞分化的能力来源：学术堂作者：姚老师发布于：2015-09-25共4864字诱导性多能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPSC）是利用基因工程技术将动物或人的体细胞重编程而得到的一种类似胚胎干细胞（embryonicstemcells,ESC）的多能干细胞类型[1].本研究小组前期研究发现，维甲酸能诱导iPSC分化成神经细胞，并且能形成功能性的神经元。但在体内特定微环境下，iPSC是否可以有效分化为不同类型的神经元和胶质细胞还不清楚。活体内环境更为复杂，目前还没有iPSC移植治疗的成功案例，iPSC能否在周围细胞和信号分子的作用下发...
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