骨髓基质细胞的分离培养及其表面抗原测定与诱导分化

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骨髓基质细胞的分离培养及其表面抗原测定与

诱导分化

来源：学术堂作者：韩老师

发布于：2014-07-31 共3128 字

骨髓基质细胞(BMSCs)是干细胞及处于不同分化阶段的前体细胞的混合物，具有自我更新能力

及多向分化潜能。由于取材方便、创伤小，用于细胞移植和基因治疗有许多优势，具有很好的

临床应用前景。由于骨髓中细胞成分比较混杂，BMSCs 在骨髓中含量极少，仅占骨髓中有核

细胞的 0 ．001% ～0 ．01%，实际应用中需对其进行体外分离纯化并大量扩增。2010 年12 月

～2012 年5 月，我们对人 BMSCs 进行分离培养，对培养细胞的表面抗原进行测定并诱导其向

脂肪细胞、成骨细胞分化，为深入研究 BMSCs 的组织再生和修复提供实验基础。

1 材料与方法

1 ．1 材料

主要试剂:α-MEM 培养基、胎牛血清(FCS) 购自美国 GIBCO 公司，细胞表面抗原检测试剂

CD45、CD90、CD29、CD14、CD105 抗体及其阴性对照抗体购自美国 BD 公司。主要设

备:CO2 恒温培养箱(BB16/BB5060 Heraeus，德国)，超净工作台(北京昌平长城空气净化工程公

司)，倒置相差显微镜(Nikon 801808，日本)，正置显微镜( Nikon E600，日本)，LDZS-2 低速自

动平衡离心机(北京医用离心机厂)，Caliber 流式细胞仪( 美国 BD 公司)。

1 ．2 方法

1 ．2 ．1 BMSCs

获得和培养骨髓来源:1 例24 岁男性颅脑外伤患者，无系统性疾病，术中用咬骨钳将损伤颅骨

板障剪成 0 ．5 cm 直径的小块，置于无菌器皿中。BMSCs 培养:在无菌条件下取出颅骨，放入

直径 120 mm 的培养皿; 用无血清 α-MEM 培养基冲洗骨松质，将骨髓冲出;反复吹打含有骨髓的

冲洗液，用 150 目铜网过滤; 滤液以 1 000 r/min 离心 5min ，弃上清。用含 10% FCS 的α-MEM

培养基重悬细胞，反复吹打制成单细胞悬液，接种于培养瓶中。

置于 37 ℃、5% 的CO2 恒温培养箱中培养，72 h 后更换新鲜培养基，去除未贴壁细胞并继续

培养，每3 ～4 d 更换新鲜培养基。待原代培养的细胞生长至80% 融合时，用 0 ．25% 胰蛋白

酶消化进行传代培养，取第3 代以后的细胞用于实验。

1 ．2 ．2 体外培养

BMSCs 的形态学观察采用倒置相差显微镜，逐日观察细胞生长情况和形态特征。

1 ．2 ．3 BMSCs

表面抗原检测采用直接免疫荧光染色流式细胞术，测定 BMSCs 表面抗原

CD45、CD90、CD29、CD14、CD105。

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骨髓基质细胞的分离培养及其表面抗原测定与诱导分化来源：学术堂作者：韩老师发布于：2014-07-31共3128字骨髓基质细胞(BMSCs)是干细胞及处于不同分化阶段的前体细胞的混合物，具有自我更新能力及多向分化潜能。由于取材方便、创伤小，用于细胞移植和基因治疗有许多优势，具有很好的临床应用前景。由于骨髓中细胞成分比较混杂，BMSCs在骨髓中含量极少，仅占骨髓中有核细胞的0．001%～0．01%，实际应用中需对其进行体外分离纯化并大量扩增。2010年12月～2012年5月，我们对人BMSCs进行分离培养，对培养细胞的表面抗原进行测定并诱导其向脂肪细胞、成骨细胞分化，为深入研究BMSCs的组织再生...

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