构建bFGF基因转染MSC的方法

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构建 bFGF 基因转染 MSC 的方法

来源：学术堂作者：周老师

发布于：2015-08-06 共1437 字

MSC 具有多项分化潜能，容易分离培养，是组织工程研究常用种子细胞之一[1].bFGF 基因转

染MSC 的过程、转染时限、效率、评估手段一直临床亟待解决的问题。探讨通过以病毒为载

体，体外构建 bFGF 基因转染 MSC 的方法，为进行 MSC 相关研究提供实验基础。具体报道如

下。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取 SD 大鼠（中国医科大学提供），体重为 150 g.

1.2 主要试剂及仪器

DMEM （美国 GIBCO）；FBS （美国 ExCell Biology）；bFGF（武汉博士德生物）；CO2 培养

箱（日本 SANYO ）；生物倒置显微镜（日本 OLYMPUS ）；高速冷冻离心机（德国

Sorvall）；WesternBlot 抗体清除缓冲液（南京凯基生物科技发展有限公司）。

1.3 研究方法

1.3.1 细胞培养取健康成年 SD 大鼠，断颈处死后，常规消毒，取双侧股骨和胫骨，去掉附着

在骨表面的软组织后，暴露骨髓腔，吸取 DMEM 培养液，洗净骨髓腔后，抽取骨髓，制成单

细胞悬液，离心处理 20 min,去除上清，添加完全培养液进行重悬，将细胞悬液接种在培养瓶

中，防置在 37℃、5%CO2 饱和湿度中进行细胞培养。每 3 天换液 1 次，待细胞汇合 80%时，

添加胰蛋白酶和 EDTA 进行消化，依据 1 :2 进行传代培养。取 3 代细胞，分为正常组、阴性组

和bFGF 组。

1.3.2 病毒转染细胞 bFGF 组将 MSC 细胞配制成细胞悬液后，滴加到细胞培养孔中，加入优化

培养基和 Ad.bFGF 液，终浓度达 5 μg/ml 时，混匀，培养 24 h 后，更换培养基继续培养 48 h.

1.3.3 免疫组化染色检测 bFGF 表达细胞样本经多聚甲醛固定液浸泡后，用 PBS 浸洗 3 次，滴

加即用型山羊血清，室温孵育，滴加一抗，37℃ 下湿盒孵育 2 h, 添加增强剂，室温湿盒孵育 30

min, 添加二抗，室温孵育 30 min, 添加 DAB 显色剂，常规复染、脱水和封固后，镜下观察细胞

形态和染色深浅。

1.4 观察指标

应用显微镜观察细胞形态改变，并应用Western- Blot 法分析bFGF 基因表达情况。

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摘要：

构建bFGF基因转染MSC的方法来源：学术堂作者：周老师发布于：2015-08-06共1437字MSC具有多项分化潜能，容易分离培养，是组织工程研究常用种子细胞之一[1].bFGF基因转染MSC的过程、转染时限、效率、评估手段一直临床亟待解决的问题。探讨通过以病毒为载体，体外构建bFGF基因转染MSC的方法，为进行MSC相关研究提供实验基础。具体报道如下。1材料和方法1.1研究对象选取SD大鼠（中国医科大学提供），体重为150g.1.2主要试剂及仪器DMEM（美国GIBCO）；FBS（美国ExCellBiology）；bFGF（武汉博士德生物）；CO2培养箱（日本SANYO）；生物倒置显微镜（...

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