ESM-1对骨髓间充质干细胞的改善机制探究
ESM-1 对骨髓间充质干细胞的改善机制探究
来源：医学研究杂志 作者：朱宗成;盛晓东;周建龙
发布于：2017-06-30 共4403 字
摘 要 目的 探讨内皮细胞特异性分子 -1 （endothelial cell - specific molecule 1,ESM -1 ） 预处理
小鼠骨髓间充质干细胞（ bone marrow - derived mesenchymal stem cells,MSCs ） 后改善其生物
学特性的机制。方法 通过不同浓度的 ESM -1, 对MSCs 进行预处理，分析其分泌的细胞凋亡相
关因子包括肿瘤坏死因子 - α （TNF - α ） 、肿瘤坏死因子 - β （TNF - β ） 和干细胞生长相关因
子： 缺氧诱导因子（ HIF ） 、转化生长因子（ TGF - β1 ） 等细胞因子含量的改变情况，以明
确ESM -1 预处理 MSCs 改善其生物学特性的机制。结果 通过不同浓度的 ESM -1 干预 MSCs
后，各浓度组 TNF - α、TNF - β、HIF、TGF - β1 含量随着 ESM -1 干预浓度的升高而升高，各
组之间差异有统计学意义（ P =0. 000 ）. 结论 ESM -1 预处理 MSCs 可提高与炎性反应、细胞凋
亡和细胞生长分化相关的多种细胞因子的含量，可能通过多种信号转导通路改善 MSCs 的生物
学特性。
关键词 内皮细胞特异性分子 -1 骨髓间充质干细胞 小鼠。
Abstract Objective To explore the possible mechanism about improving the biological characteristics
of endothelial cell - specificmolecule 1 （ESM - 1 ）pretreated with mice MSCs. Methods MSCs was
pretreated by different concentration of ESM - 1. The possiblemechanism was analyzed about
improving the biological characteristics of mice MSCs pretreated with ESM - 1 through analysis of its
secre-ted cytokines content. The cytokines include apoptosis related factors: TNF - α and TNF - β ；
stem cell growth factor related: HIF andTGF - β1. Results After the intervention of MSCs with
different concentration of ESM - 1,the content of cytokines levels includingTNF - α，TNF - β，HIF
and TGF - β1 increased with the increase of the intervention concentration of ESM - 1. The difference
between thegroups was statistically significant （P = 0. 000 ）. Conclusion ESM - 1 pretreatment with
MSCs can improve the content of many cytokinesrelated to inflammatory response,cell apoptosis,cell
growth and differentiation,which may improve the biological characteristics of MSCsthrough a variety
of signal transduction pathways.
Key words Endothelial cell - specific molecule 1; Bone marrow - derived mesenchymal stem cells;
Mice.
ESM - 1 是具有多种生物学活性的细胞因子。本课题组前期研究证实，ESM - 1 预处理 MSCs
后可提高其存活、增殖能力，增加干细胞移植后的梗死周围心肌组织血管形成[1,2]. 目前 ESM -
1 改善 MSCs 生物学特性的具体机制尚不明确。因此，本实验对其可能机制进行探讨。
材料与方法。
1. 材料： 健康 SD 小鼠； CD29、CD44 抗体（ 北京夏斯生物科技有限公司，prospec cat:
SV30010 ）; ESM -1 （Cusabio Biotech 公司）; TNF - α （USCN,SEA133Mu ） 、TNF - β （
USCN,SEA134Mu ） 、TGF - β1 （USCN,SEA124Mu ） 、HIF - 1α （USCN,SEA798Mu ）.器
械： CO2 培养箱（ 上海博讯公司，cat: BC - J160S ）; 流式细胞仪（ BD C6 ）; 倒置相差显微镜
（ 日本 Nikoneclipse Ts100 ）; 数字显示隔水式电热恒温培养箱（ 上海跃进医疗器械厂） .
2. MSCs 获取、培养： 取 2 月龄 SD 小鼠，冲出股骨骨髓成单细胞悬液，以 1000r/min 离心
5min. 弃上清，用含 100ml/L FBS 的DMEM 培养基重悬稀释，以（ 1 ~ 5 ）× 109 个/L 的密度接
种、培养（ 37℃、50ml/LCO2 、饱和湿度） . 待细胞 90%汇合时传代，传代至第 3 代时的
MSCs 用于实验。
3. MSCs 标志鉴定： 细胞融合达 90% 时，用 2. 5g /L 胰蛋白酶消化，制成细胞悬液，经 100 目
的滤筛过滤，2000r/min 离心 5min. 弃上清，用 PBS 制成 2 ×105/ L 的细胞悬液用于实验。细胞
悬液分装在 2 支样品管中，分别加入Anti - mouse CD29、Anti - CD44- FIT; 37℃ 条件下，与细
胞悬液反应 20min.加入PBS 1ml 混匀，2000r / min 离心 10min, 弃上清。每管再加入PBS 0. 5ml
制成细胞悬液，经流式细胞仪检测细胞表面抗原CD29、CD44 的表达情况。
4. 实验分组： 将MSCs 接种至 12 孔板，用含有 10% FBS 的DMEM 培养基培养，当细胞培养
摘要：
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ESM-1对骨髓间充质干细胞的改善机制探究来源：医学研究杂志作者：朱宗成;盛晓东;周建龙发布于：2017-06-30共4403字摘要目的探讨内皮细胞特异性分子-1（endothelialcell-specificmolecule1,ESM-1）预处理小鼠骨髓间充质干细胞（bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells,MSCs）后改善其生物学特性的机制。方法通过不同浓度的ESM-1,对MSCs进行预处理，分析其分泌的细胞凋亡相关因子包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）和干细胞生长相关因子：缺氧诱导因子（HIF）、转化生长因子（TGF-...
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