浅谈棕榈酸促进心肌细胞凋亡的作用

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浅谈棕榈酸促进心肌细胞凋亡的作用

来源：湖北科技学院学报作者：黄聪;姜志龙

发布于：2020-04-08 共3223 字

　　细胞凋亡论文（期刊推荐范文 8篇）之第八篇

　　摘要：目的本研究旨在探讨棕榈酸 (PA) 对H9C2 心肌细胞凋亡的影响及活性氧水平的改

变在其中的作用。方法不同浓度 (0、50、100、200、400、800μmol/L) PA 作用于心肌细胞

18h, 流式细胞术检测细胞早期凋亡率,DCFH-DA 探针法检测细胞内活性氧水平。结果 PA

50μmol/L 时细胞早期凋亡率有所增加,PA 100μmol/L 时, 细胞早期凋亡率明显增加, 活性氧水平

明显增加,PA 400μmol/L 和800μmol/L 时细胞密度出现大量减少。结论 PA 不同浓度作用于

H9C2 心肌细胞会导致细胞凋亡, 其原因可能与 PA 增加细胞活性氧的产生有关。

　　关键词：棕榈酸,心肌细胞,活性氧,凋亡

心血管疾病是一种慢性疾病, 主要包括心肌梗死、心力衰竭、血管脂质功能紊乱等, 它是全球第

一大死因, 严重危害人类健康[1]。高脂血症是心血管疾病的主要危险因素之一, 维持脂质体内平

衡是预防心血管疾病的有效方法[1] 。棕榈酸 (PA) 是人类血液中含量最高的一种饱和脂肪酸, 其

含量的增加会促进心血管疾病的发生[2,3]。研究表明, 饱和脂肪酸具有导致脂质毒性的作用, 对

许多细胞类型诱导内质网应激和细胞凋亡[4]。心肌细胞凋亡在心脏功能紊乱和心力衰竭中具有

重要影响, 减少心肌细胞的凋亡可以改善心脏功能和心肌损伤, 有助于减少心血管疾病的发生发

展。我们拟用不同浓度 PA 作用于 H9C2 心肌细胞, 观察 PA 对心肌细胞凋亡的影响, 为心血管疾

病的防治提供依据。

　　 1　材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞与相关试剂

H9C2 大鼠胚胎心肌细胞 (武汉华联科生物技术有限公司) ;DMEM 培养基 (低糖, Hyclone 公司) ;

胎牛血清 (FBS, Gibco 公司) ;青/ 链霉素 (P/S, Hyclone 公司) ;0.25%EDTA 胰酶 (Gibco 公司) ;棕榈

酸(Palmitate, PA, Cat#H8780-100g, Solarbio 生物有限公司) ; 活性氧 (reactive oxygen species,

ROS) 测试试剂盒 (E004, 南京建成生物技术有限公司) ;AnnexinV-FITC 细胞凋亡检测试剂盒

(KGA108, 凯基生物公司) 。

1.1.2 主要仪器

超净工作台 (苏州苏洁净化) ;CO2 细胞培养箱 (美国 Thermo 公司) ; 倒置荧光显微镜 (日本 O-

lympus 公司) ;HVE-50 高压灭菌器 (日本 Hirayama 公司) ;PGYJ-20-AS (超) 纯水机 (武汉品冠仪

器设备有限公司) ;CytoFLEX 流式细胞仪 (Beckman 公司) 。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

用含 10%胎牛血清和 2%青/链霉素的低糖 DMEM 培养基培养细胞, 静置于 37℃、5%CO2 的细

胞培养箱, 每两天换液一次, 待细胞生长至融合度为 80%～90%时, 用0.25%EDTA 胰酶进行消化

传代培养, 取对数生长期细胞进行实验。

1.2.2 PA 的配制

将25.6mg 的PA 粉末溶解于1mL 无水乙醇配制成100mμmol/L 母液, 使用前用不含饱和脂肪酸

的BSA 配制成1mμmol/L 工作液, 在37℃水浴锅中轻摇混匀使其完全溶解, 使用孔径为0.22m 的

滤膜过滤备用。

1.2.3 实验分组

使用PA 不同浓度梯度: 正常对照组 (control 组, 使用DMEM 低糖培养基培养)

、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L, 分别培养 18h, 进行细胞流式检

测;正常对照组、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L, 分别培养 18h, 进行细胞 ROS

检测。每实验重复3次。

1.2.4 流式细胞术检测 H9C2 心肌细胞凋亡

将H9C2 心肌细胞传代到 25cm2 培养瓶中, 细胞密度为 4×105 个/瓶, 待细胞贴壁后将培养液吸出

加入含2%FBS 的低糖培养基培养 1h, 吸去低血清培养基后, 再向每瓶中加入不同浓度含 PA 的

培养液继续培养 18h, 收集上清液, 磷酸盐缓冲液清洗细胞两次, 用胰酶消化收集细胞, 加入PBS

重悬, 离心弃上清, 按照说明书步骤加入试剂避光反应15min, 于1h 内上机检测, 用Flowjo 软件

分析细胞不同状态, 结果以凋亡细胞百分率表示。

1.2.5 检测 PA 对H9C2 心肌细胞活性氧 (ROS) 水平的影响

将H9C2 心肌细胞传代到 24 孔板中, 细胞密度为 1×104 个/孔, 待细胞贴壁后将培养液吸出加入

含2%FBS 的低糖培养基培养 1h, 向接种细胞的孔中加入含不同 PA 浓度的培养液培养 18h 后,

弃去培养基, 用PBS 清洗细胞两次, 4%多聚甲醛溶液固定细胞 10min, PBS 冲洗两次, 加入用无血

清培养基配至终浓度为 20μm/L 的荧光探针作用 20min, 终止探针作用时, 用PBS 清洗细胞两次,

在荧光显微镜下观察并拍照。

1.3 统计学分析

实验数据采用GraphPad Prism 7.0 统计软件进行处理, 数据采用表示, 组间数据比较采用单因素

方差分析, P 0.05�为差异有统计学意义。

　　 2　结果

2.1 不同浓度 PA 对H9C2 心肌细胞凋亡情况的影响

流式细胞仪检测结果显示, 不同 PA 浓度设定为50、100、200、400 和800μmol/L 时, 作用于

H9C2 细胞 18h, 从图 1A (封二) 第三象限, 结合图 1B (封二) 统计图可知, 细胞的早期凋亡率分别

为(2.39±0.8) % 、(5.32±2.37) % 、(10.20±3.54) % 、(8.18±1.03) % 、(8.17±3.98) % 、(3.36±1.46)

%, 从结果可以看出, PA 浓度为 0、50、100μmol/L 时, 浓度依赖性的增加细胞的早期凋亡率, 其

中PA 浓度为 100μmol/L 时, 细胞早期凋亡率出现明显上升, 与control 组相比, 具有显着性差异

(P<0.05, n=3) , 表明不同浓度的 PA 能导致心肌细胞的损伤。从图 1A 第二象限, 结合图 1C (封

二) 统计图结果表明, PA 浓度为 200、400 和800μmol/L 时, 细胞的晚期凋亡率与对照组相比有

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浅谈棕榈酸促进心肌细胞凋亡的作用来源：湖北科技学院学报作者：黄聪;姜志龙发布于：2020-04-08共3223字　　细胞凋亡论文（期刊推荐范文8篇）之第八篇　　摘要：目的本研究旨在探讨棕榈酸(PA)对H9C2心肌细胞凋亡的影响及活性氧水平的改变在其中的作用。方法不同浓度(0、50、100、200、400、800μmol/L)PA作用于心肌细胞18h,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平。结果PA50μmol/L时细胞早期凋亡率有所增加,PA100μmol/L时,细胞早期凋亡率明显增加,活性氧水平明显增加,PA400μmol/L和800μmol/L时细胞密度出现...

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