人胚肺二倍体细胞2BS株在两种培养瓶中的特性比较
人胚肺二倍体细胞 2BS 株在两种培养瓶中的特
性比较
来源：学术堂 作者：韩老师
发布于：2014-07-31 共2082 字
人胚肺二倍体细胞来源于人胎儿组织,具有正常的生物活性和功能性,对多种病毒敏感,而不诱发
癌变,多用来培养病毒和制备疫苗。随着科技的发展,更多的疫苗制品启用二倍体细胞作为生产
疫苗基质。其安全性及疫苗的免疫原性都有所提高。如水痘减毒活疫苗、甲肝疫苗常用的二倍
体细胞株有 2BS、MRC-5、KMB-17 等。
采用人体同源的细胞作为细胞基质,疫苗质量逐渐上升,在免疫效果和安全性上都有所报道。由
于人胚肺二倍体细胞生物学特性稳定,在延缓衰老药物,病毒研究,医学方面也得到了广泛应用。
本实验通过对人胚肺二倍体细胞 2BS 株在两种培养瓶中的培养特性比较,选择更适合二倍体细
胞生长的培养瓶,提高细胞质量和利用率,为各项研究提供优质的细胞。
1 材料与方法
1.1 细胞株
人胚肺二倍体细胞 2BS 株:27 代,由长春祈健生物制品有限公司研究室提供,批号为 20120320。
1.2 细胞培养瓶
玻璃方瓶(培养面积 35cm2)由四川万福玻璃仪器有限公司提供,T75 培养瓶(培养面积 75cm2)由美
国Thermo 公司提供。
1.3 主要试剂和仪器
MEM 培养基(美国实验室有限公司);新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);谷氨酰胺
(武汉大华伟业有限公司);碳酸氢钠(北京化工厂);恒温培养箱(日本三洋电器股份有限公司);倒置
显微镜(重庆光学仪器厂),pH 剂(上海精密仪器有限公司)、细胞计数仪(美国 Inno-Alliance
Biotech 公司)。
1.4 细胞复苏和连续传代培养
从液氮取出保存二倍体细胞冻存管置于 40℃水浴速溶。迅速将细胞混合均匀后以相同的接种浓
度分别接种于 T75 培养瓶和玻璃方瓶中,并补足相应的细胞复苏液,置于 37℃恒温培养箱中进行
培养。
16—24h 换复苏液后继续培养,并观察细胞生长状态。细胞培养至单层后,对细胞培养液进行 PH
测定。并经胰蛋白酶消化后,加入生长液吹打至细胞脱落混合均匀后细胞计数,按1:4 比例连续传
代培养。观察记录各代次细胞的生长状态及其它指标。
2 结果
2.1 细胞生长状态比较
细胞传代后显微镜观察比较,T75 培养瓶细胞长势明显优于玻璃方瓶。细胞贴壁迅速,分裂速度
快,细胞密度大,胞质相对饱满。
T75 培养瓶内细胞前58 代3天均可形成单层,细胞无明显差异。当细胞传代至58—68 代时,细胞
贴壁和增殖能力减弱,细胞表面有颗粒存在,,单层时间延长。68 代以后,细胞急剧衰退。72 代细
胞呈网状,不易成片无法单层。见图 1。【图 1】
玻璃方瓶内细胞前48 代3天均可形成单层,细胞生长状态无明显差异。当细胞在 50—58 代传代
过程中,细胞贴壁和增殖能力减弱,细胞变暗,细胞表面有颗粒存在,单层时间延长。60 代细胞呈网
状,不易成片,无法单层。见图 2。【图 2】
2.2 细胞计数
细胞传代培养 72h 后,对两种培养瓶内细胞经胰酶消化后,生长液稀释 10 倍细胞计数比较,相同代
次T75 培养瓶单位面积细胞数明显多于玻璃方瓶。T75 培养瓶内细胞 58 代数量无明显差异,58
代以后细胞数开始减少;玻璃方瓶内细胞 48 代数量无明显差异,48 代以后细胞数开始减少;见表
1。【表 1】
两种培养瓶单位面积各代细胞计数:
2.3 PH 值变化
细胞传代 72 小时后,两种培养瓶内生长液 PH 测量比较,T75 培养瓶内58 代前液体 PH 值无明显
差异,58 液体 PH 值升高明显。玻璃方瓶内48 代前液体 PH 值无明显差异,48 代后液体 PH 值升
摘要：
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人胚肺二倍体细胞2BS株在两种培养瓶中的特性比较来源：学术堂作者：韩老师发布于：2014-07-31共2082字人胚肺二倍体细胞来源于人胎儿组织,具有正常的生物活性和功能性,对多种病毒敏感,而不诱发癌变,多用来培养病毒和制备疫苗。随着科技的发展,更多的疫苗制品启用二倍体细胞作为生产疫苗基质。其安全性及疫苗的免疫原性都有所提高。如水痘减毒活疫苗、甲肝疫苗常用的二倍体细胞株有2BS、MRC-5、KMB-17等。采用人体同源的细胞作为细胞基质,疫苗质量逐渐上升,在免疫效果和安全性上都有所报道。由于人胚肺二倍体细胞生物学特性稳定,在延缓衰老药物,病毒研究,医学方面也得到了广泛应用。本实验通过对人胚肺二...
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作者：闻远设计
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