诱导多潜能干细胞转化为神经前体细胞的实验分析

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诱导多潜能干细胞转化为神经前体细胞的实验

分析

来源：学术堂作者：朱老师

发布于：2016-11-17 共5630 字

诱导多潜能干细胞（induced pluripotent stemcells,i PSCs ）是通过在分化的体细胞中表达特定转

录因子，以诱导体细胞重编程而获得的可不断自我更新且具有多向分化潜能的细胞。i PSCs 在

功能上类似于胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs ）,增殖分化能力强，既能避免免疫排

斥，又不涉及伦理道德问题，而且取材方便，具有重要潜在临床应用价值[1].因此，自开始培

养出 i PSCs[2,3]以来，全世界众多实验室都对 i PSCs 进行了研究并取得了很大进展。

但将 i PSCs 用于脑内移植治疗卒中动物模型后发现，i PSCs 极易形成肿瘤，也难以确定有无成

熟神经元形成[4 ~ 6],对模型动物行为学改善也报道不一[4 ~ 6]; 即使将 i PSCs 植入正常小鼠脑

内也一样具有成瘤性[7].

由于 i PSCs 在形态及生物学功能上类似 ESCs 而会在移植后形成畸胎瘤[8],故许多人认为如果移

植前将 ESCs 在体外预先分化就可以减少肿瘤形成的危险性[9].这可以先将 ESCs 诱导成神经前

体细胞（neural precursor cells,NPCs ）,再把 ESCs 来源的 NPCs 植入脑内。研究发现，这种

NPCs 不但可以存活，而且能向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化，甚至有的细胞具

备成熟神经元的电学特性，重要的是没有出现肿瘤[10 ~ 12].目前报道的将 ESCs 诱导成 NPCs

的方法有多种，但一般都难以重复。为此，本实验采用经拟胚体（embryoid bodies,EBs）以及

N2B27 为选择培养基，多步法贴壁培养诱导 NPCs,为国内从事本领域研究的同道提供借鉴，也

为下一步细胞移植治疗缺血性脑损伤做准备。

材料和方法

1.小鼠 i PSCs 的培养

本实验 i PSCs 由中国科学院动物研究所提供，培养方法参照文献[13].

2. i PSCs 向NPCs 的诱导

吸去 ESCs 培养液，PBS 洗3次后用 0. 05%的胰蛋白酶消化 2min,ESCs 培养液中和，玻璃吸管

吹打，1000r/min 离心 5min, 去上清。添加新鲜的ESCs 培养液，玻璃吸管吹打成单细胞悬

液，接种到0. 1% 明胶包被的瓶内，37℃ 、5% CO2 孵育 30 ~60min, 去除胎鼠成纤维细胞

（mouse embryofibroblast,MEF）。吸取细胞悬液，1000r / min 离心 5min,吸去上清，添加

N2B27 培养基重悬细胞，接种在无任何包被的瓶内，入 37℃、5% CO2 孵箱培养，次日观察

EBs 的形成。EBs 培养 4 ~ 7d,每天换液。离心收集 EBs,用N2B27 培养基将其重悬，接种在 0.

5%明胶包被的塑料培养瓶内贴壁培养，隔天换液。10d 后EBs 爬出神经干细胞样细胞，0. 05%

胰蛋白酶消化，接种在 0. 1%明胶包被的6孔板上，用 NPCs 培养基培养，每天换液，2 ~ 3d 传

代。

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摘要：

诱导多潜能干细胞转化为神经前体细胞的实验分析来源：学术堂作者：朱老师发布于：2016-11-17共5630字诱导多潜能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPSCs）是通过在分化的体细胞中表达特定转录因子，以诱导体细胞重编程而获得的可不断自我更新且具有多向分化潜能的细胞。iPSCs在功能上类似于胚胎干细胞（embryonicstemcells,ESCs）,增殖分化能力强，既能避免免疫排斥，又不涉及伦理道德问题，而且取材方便，具有重要潜在临床应用价值[1].因此，自开始培养出iPSCs[2,3]以来，全世界众多实验室都对iPSCs进行了研究并取得了很大进展。但将iPS...

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