RNA的提取技术与RNase的污染防治

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RNA 的提取技术与 RNase 的污染防治

RNA 的提取技术是现代分子生物学中最常用的操作技术之一。不同组织中总 RNA 的提取实质

上就是将组织细胞裂解，从而释放 RNA, 在进一步的研究中，我们高度依赖所提取的总 RNA 的

质量。RNA 样品易受环境因素特别是 RNase 的影响而降解[2], 提取 RNA 的过程中，只要存在

少量的 RNase 就会引起 RNA 降解。故在实验中应严格控制各个影响因素、防止 RNase 的污

染，是提取高质量 RNA 样品的关键。

1 组织质量的影响

组织样本质量是 RNA 提取实验成功与否的重要因素之一。我们的实验是小鼠肿瘤组织总 RNA

的提取，基本所有组织和细胞都含有内源性 RNase, 为了防止总 RNA 的降解，使用液氮来速冻

组织，在研磨组织的过程中，我们使用研钵加液氮研磨法进行研磨[3].即研磨过程中将组织放

入研钵后，加入液氮研磨并及时添加液氮，确保肿瘤组织能够一直浸在液氮中，防止 RNA 降

解，保证 RNA 的质量。

2 实验器具的影响

由于 RNA 本身不稳定，加之 RNase 的普遍存在，使得分离完整的 RNA 分子更为困难[4].在

RNA 提取过程中最主要是防止外源性 RNase 的污染，首先是要保证整个实验在超净工作台中

完成；其次是对实验器具进行处理，主要有以下几点：（ 1 ）研磨过程使用的研钵需要高温

干燥处理后使用；（ 2 ）实验中使用的 EP 管，枪头等塑料制品，需要用 DEPC 水[1] 浸泡 24h

后，经高温灭菌干燥后使用；（ 3 ）为了防止 RNase 的污染，用 DEPC 水替代三蒸水进行溶液

的配制；（ 4 ）RNA 操作中使用专用的器械，有条件的也可以设置专用实验室。

3 实验人员的影响

实验人员对整个实验的影响，主要是外源性 RNase 的影响。外源性的 RNase 是无处不在的，

它很容易污染实验中的各种器材、实验用品和实验试剂等；实际操作过程中，手套是最容易污

染样品的，因此手套要勤换；实验操作人员说话过程中所带的唾液中也会携带 RNase,会导致

样品的降解，故需带口罩操作；在 RNA 整个提取过程中，实验人员熟练快速的完成整个 RNA

的提取，减少实验所用的时间，也可有效减少外源性 RNase 污染的几率。

4 实验试剂的影响

RNA 提取的过程中，每一步所用试剂的量，以及所用的时间都会影响 RNA 的完整性、含量及

纯度。

4. 1 Trizol 试剂

Trizol 试剂是即用型细胞和组织总 RNA 提取试剂，可直接从组织或细胞中提取总 RNA,能迅速

裂解细胞，并抑制细胞释放出来的核酸酶；使用 Trizol 试剂时，1mL Trizol 最多裂解 100mg 的

组织，而在实际实验中，我们发现 100mg 的组织使用 1. 2mL Tr-izol 裂解，可以获得更满意的

结果。

4. 2 氯仿

氯仿也叫三氯甲烷，是一种有机物- 烃的衍生物，在光照下遇空气会逐渐被氧化并生成剧毒的

光气，因此需要存放在密封的棕色瓶中；氯仿分离是 RNA 提取实验关键步骤之一，匀浆后的

组织液中加入氯仿，震荡离心后，RNA 会溶解在上层的水相中，转移 RNA 到新管的过程中，

采用小枪头少量多次吸取，可防止误吸下层杂质[6].

4. 3 异丙醇和乙醇

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摘要：

RNA的提取技术与RNase的污染防治RNA的提取技术是现代分子生物学中最常用的操作技术之一。不同组织中总RNA的提取实质上就是将组织细胞裂解，从而释放RNA,在进一步的研究中，我们高度依赖所提取的总RNA的质量。RNA样品易受环境因素特别是RNase的影响而降解[2],提取RNA的过程中，只要存在少量的RNase就会引起RNA降解。故在实验中应严格控制各个影响因素、防止RNase的污染，是提取高质量RNA样品的关键。1组织质量的影响组织样本质量是RNA提取实验成功与否的重要因素之一。我们的实验是小鼠肿瘤组织总RNA的提取，基本所有组织和细胞都含有内源性RNase,为了防止总RNA的降解，使用...

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