观察姬松茸粗多糖对D-gal致脑老化模型小鼠行为学的影响
观察姬松茸粗多糖对 D-gal 致脑老化模型小鼠
行为学的影响
来源：学术堂 作者：姚老师
发布于：2014-06-05 共3363 字
姬松茸(Agaricus Blazei Murill)为蘑菇科蘑菇属真菌,富含蛋白质和糖类。姬松茸多糖是从姬
松茸子实体中提取的有效活性成分,具有螺旋状的三维立体结构,是一种 β型的葡聚糖。据相关
研究报道:姬松茸多糖具有降血糖、提高免疫力、抗病毒和抗肿瘤等作用。关于姬松茸多糖提
高脑老化小鼠学习记忆能力的作用及其机制的研究国内外尚未见报道。
D-半乳糖(D-gal)致动物衰老模型由徐黻本首次提出,在国内已被广泛应用。许多学者在大鼠和小
鼠上都证实该模型表现出几种与人类自然衰老相类似的机能改变,包括出现脑老化。
本研究以颈背部皮下注射 D-gal 制备脑老化小鼠模型,采用水迷宫、避暗仪、流式细胞术等实验
方法,观察姬松茸粗多糖对 D-gal 致脑老化模型小鼠行为学、海马神经细胞线粒体膜电位及凋亡
的影响,探讨其提高脑老化小鼠学习记忆能力的作用及可能机制,为更好地开发利用姬松茸资源
提供实验依据。
1、材料与方法
1.1 动物
雄性昆明种小鼠 40 只,体质量 20~25g,由广东省医学实验动物中心提供,生产许可证
号:SCXK(粤)2008-0002。
1.2 药品制备
姬松茸粗多糖由本研究组自制:取姬松茸原菌体 1000g,加约 5倍蒸馏水浸泡 12h,文火煮沸 1h,收
集煎液,再加等体积的蒸馏水文火煮沸 30min,收集煎液。合并 2次煎液,静置 12h,过滤,浓缩至一
定体积后,加入 80%的乙醇沉淀 12h,离心,收集醇沉物。醇沉物于恒温干燥箱(75℃~80℃)至相对
干燥,获得姬松茸多糖粗制品,每克浸膏相当于生药 3.0g。
1.3 主要试剂与仪器AnnexinV-FITC&PI 试
剂盒为美国Pharmingen 公司产品,JC-1 试剂盒为美国Cell Technology(细胞工程)公司产
品;Morris 水迷宫(中国医学科学院药物研究所,型号:DMS-2),小鼠避暗仪(成都泰盟公司,型号:BA-
200),流式细胞分析仪(美国贝克曼库尔特公司,型号:FC500)。
1.4 动物模型制备与分组
小鼠随机分为 4组,每组 10 只:正常组,D-gal 脑老化模型组,姬松茸粗多糖低、高剂量组。除正常
组小鼠颈背部皮下注射生理盐水外,其他各组小鼠颈背部皮下注射 D-gal120mg·kg-1,每天1次,连
续42d,制备小鼠亚衰老模型。在制备动物模型的同时,正常组和模型组小鼠灌胃生理盐水,姬松
茸粗多糖低、高剂量组小鼠分别灌胃姬松茸粗多糖 60 和120mg·kg-1,每天1次。
42d 后进行行为学、海马神经细胞线粒体膜电位及凋亡的检测。行为学检测期间正常饲养小
鼠。
1.5 空间探索测试
测试设备为 Morris 水迷宫。迷宫水池壁上标明4个等距离点,等分成 4个象限。在位于池壁和圆
心中间的第4象限放置一平台,平台没于水下 1cm,水中倒入牛奶,使小鼠视觉无法辨别平台。设
定平台为中心,中心区域为半径5cm 环内,中环为向外25cm 内,外环为再向外40cm。通过迷宫上
方与计算机相连接摄像机全程跟踪小鼠活动轨迹。实验在安静环境进行,水池水温
(25.0±1.0)℃。正式测试前先对各组小鼠进行适应性训练:从水迷宫池壁第 2象限(远离目标象限)
处放下小鼠,记录小鼠从入水到爬上平台所需的时间。如果小鼠在 3min 内未找到平台,由实验者
将其引导至平台,待小鼠爬上平台并停留 20s。每天训练 1次,连续 5d。第6天撤去平台,随机选
下水点进行正式测试,以3min 内小鼠分别在中心区、中环、外环的游泳距离占总距离的百分比
及第4象限(目标象限)游泳路程表示小鼠学习记忆能力。
1.6 被动回避测试
避暗仪由明暗两室组成,大小相同,底部为不锈钢栅。明室上方装置15W 日光灯一只,暗室通 36V
电压。首先进行记忆获得性训练:将小鼠放入明室,因天生具有嗜暗习性,小鼠钻入暗箱即遭受电
击,迅速逃离暗室,从而获得暗箱遭受电击记忆,为期1d。
24h 后,将小鼠放入明室,记录300s 内小鼠放入明室到进入暗室的时间(潜伏期)和进入暗室的次数
(错误次数),以此表示小鼠的学习记忆能力。
1.7 海马神经细胞线粒体膜电位测定
小鼠颈椎脱臼处死,迅速取出全脑,冰盘上分离海马,投入液氮冷冻后取出,放入冰箱(-80℃)保存备
用。
检测时,海马置于盛生理盐水的培养皿,用2张处理洁净的载玻片轻研组织至匀浆状,过300 目筛
网制备成单细胞悬液,悬液于室温下 5000r·min-1 离心 2min,弃上清,加入 10mg·L-1 的JC-1,避光静
置15min 后,以激发波长 488nm 行流式细胞分析。采用 Cell Quest 数据处理软件,获取 1×104 个
细胞。以测量JC-1 的荧光强度(反映线粒体膜电位的高低)来了解小鼠海马神经细胞线粒体膜电
位的变化。
1.8 海马神经细胞凋亡检测
制备单细胞悬液(方法同1.7),冰预 PBS 洗细胞 2次,以1×结合缓冲液重悬细胞,并调整细胞浓度至
1×106mL-1,取细胞悬液100μL 至5mL 管,再加入 Annexin-V-FITC5μL、PI10μL,混匀。于避光室
温下孵育 15min,然后每管加入 1×结合缓冲液400μL,1h 内激发波长 488nm 行流式细胞分析。计
数1×104 个细胞,所有资料均经CellQust 软件收集处理,以细胞凋亡百分率表示小鼠海马神经细
胞凋亡情况。
1.9 统计学分析
采用 SPSS14.0 软件包进行统计分析,各组小鼠空间探索测试指标、潜伏期、错误次数、线粒体
膜电位和细胞凋亡百分率以x±s 表示,组间比较采用单因素方差分析。
摘要：
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观察姬松茸粗多糖对D-gal致脑老化模型小鼠行为学的影响来源：学术堂作者：姚老师发布于：2014-06-05共3363字姬松茸(AgaricusBlazeiMurill)为蘑菇科蘑菇属真菌,富含蛋白质和糖类。姬松茸多糖是从姬松茸子实体中提取的有效活性成分,具有螺旋状的三维立体结构,是一种β型的葡聚糖。据相关研究报道:姬松茸多糖具有降血糖、提高免疫力、抗病毒和抗肿瘤等作用。关于姬松茸多糖提高脑老化小鼠学习记忆能力的作用及其机制的研究国内外尚未见报道。D-半乳糖(D-gal)致动物衰老模型由徐黻本首次提出,在国内已被广泛应用。许多学者在大鼠和小鼠上都证实该模型表现出几种与人类自然衰老相类似的机能改...
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