高氧对肺损伤患儿的影响研究

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高氧对肺损伤患儿的影响研究

来源：学术堂作者：周老师

发布于：2016-03-04 共2682 字

近年随着科技的进步，越来越多的极度早产儿和极低出生体质量儿幸存下来，但是由于长期吸

入高浓度氧，患儿可发生肺损伤，严重者甚至发生支气管肺发育不良（ BPD）[1,2].目前，高

氧性肺损伤的机制尚不清楚，最近研究的热点主要集中在氧化应激方面[3,4], 而NAD+依赖性的

组蛋白去乙酰化酶（ SIRT1 ）在氧化应激及 DNA 损伤修复中发挥重要作用[5].本研究在前期实

验基础上，通过建立高氧损伤人肺泡上皮细胞（ HPAEC ）模型[6], 探讨 SIRT1 转位是否介导

肺泡上皮细胞发生凋亡，从而为减轻高氧肺损伤寻找新的治疗靶点。

　　 1　材料与方法。

1. 1 细胞、仪器及试剂 HPAEC 细胞购自广州吉妮欧生物科技有限公司。LX71 型倒置相差显微

镜购自 Olympus 公司，FORMA311 型CO2 培养箱、胎牛血清、DMEM 高糖培养基购自

Gibco 公司，ANNEXIN V 流式细胞凋亡检测试剂盒购自凯基生物公司，单克隆小鼠抗 SIRT1

抗体购自博士德生物公司，罗丹明标记山羊抗小鼠 IgG 购自 ZSGB-BIO 公司，DAPI 购自碧云

天生物公司，抗荧光淬灭封片液购自碧云天生物公司，单克隆小鼠抗 SENP1 抗体与单克隆抗

乙酰化 p53lys （382 ）抗体购自 Abcam 公司，ECL 化学发光试剂购自北京普利莱基因技术有

限公司。

l. 2 HPAEC 细胞培养先将 HPAEC 细胞复苏，加入含有 10% 胎牛血清的 DMEM 高糖培养液，

放入 37 ℃ 、含 5% CO2 培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期时，用 0. 25% 的胰蛋白酶进

行消化，传代培养。

1. 3 HPAEC 细胞分组及高氧干预取对数生长期的细胞，消化后传代接种于培养瓶中，随机分

为高氧组、对照组。对照组不作处理，放置于 50 mL/L CO2 培养箱中培养；高氧组换液 1 次

后，以 3 L/min 的速度通入含 900 ml/L O2 和50 mL/L CO2 高纯混合气，通入时间为 10 min,参

照我们前期高氧模型建立的方法[6]. 分别培养 24 h （高氧组细胞干预 24 h 后，使用测氧仪检测

培养瓶中氧浓度，如果氧浓度 <90% 则弃去该标本） , 之后收集HPAEC 细胞。

1. 4 HPAEC 细胞凋亡情况观察两组细胞培养 24 h 后，收集细胞，用流式细胞仪检测，按照凯

基ANNEXIN V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒说明书操作。

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摘要：

高氧对肺损伤患儿的影响研究来源：学术堂作者：周老师发布于：2016-03-04共2682字近年随着科技的进步，越来越多的极度早产儿和极低出生体质量儿幸存下来，但是由于长期吸入高浓度氧，患儿可发生肺损伤，严重者甚至发生支气管肺发育不良（BPD）[1,2].目前，高氧性肺损伤的机制尚不清楚，最近研究的热点主要集中在氧化应激方面[3,4],而NAD+依赖性的组蛋白去乙酰化酶（SIRT1）在氧化应激及DNA损伤修复中发挥重要作用[5].本研究在前期实验基础上，通过建立高氧损伤人肺泡上皮细胞（HPAEC）模型[6],探讨SIRT1转位是否介导肺泡上皮细胞发生凋亡，从而为减轻高氧肺损伤寻找新的治疗靶点。　...

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