低强度脉冲超声波对脂肪干细胞成骨分化效能的影响
低强度脉冲超声波对脂肪干细胞成骨分化效能
的影响
来源：学术堂 作者：韩老师
发布于：2014-08-21 共4079 字
超声波是一种高频声波，也是机械能的一种形式，通过高频 ( 1 ～12 MHz) 的压力波来传递能
量，低强度脉冲超声波 ( LIPUS) 一般指强度 ＜ 100 mW/cm2 的超声波。20 世纪 80 年代初
Duarte 首先报道了 LIPUS ( 强度为 30 mW/cm2) 能加速动物骨折愈合，他们的研究进一步发现:
低强度脉冲超声波可刺激骨折愈合，缩短愈合时间。根据 Wolf “定律 骨的形成与结构可随外力
”的大小与方向而重建，骨骼的生理反应和愈合过程可受机械力学影响 ，超声产生的机械力刺
激是否也能对骨骼的愈合产生影响逐渐受到人们的关注。干细胞的分化方向不仅取决于其自身
与外界调控信号之间的相互作用，而且还受到周围组织的三维结构及机械力的影响。而脂肪干
细胞( adipose derived stem cells，ADSCs) 以其来源丰富、较易获取、一次取材即可获取大量细
胞及对机体创伤较小等优点，成为继 BMSC 以外另一个研究热点。本实验旨在研究低强度脉
冲超声波对脂肪干细胞成骨分化效能的影响。
1 材料、仪器和试剂
1. 1 标本采集脂肪细胞取自于无锡市人民医院 18 ～45 岁手术患者，部位为腹部及腰背部处，
不合并重大内科疾病，经知情同意。取下的脂肪细胞经分离培养后用于本实验。
1. 2 实验试剂和材料 DMEM － 低糖培养基 ( 美国 Hyclone 公司) ，Gibco 胎牛血清 ( 美国
Invitrogen 公司) I 型胶原酶、胰蛋白酶、BSA ( 美国 Sigma 公司) ，青链霉素 ( 美国 GIBeo 公
司) ，地塞米松 ( 美国 Sigma 公司) ，维生素 C ( 美国 Sigma 公司) ，油红 O ( 美国 Sigma 公司)
，吲哚美辛 ( 美国 Sigma 公司) ，IBMX ( 美国 Sigma 公司) ，EDTA ( 美国 Sigma 公司) ，CD29
/CD14 /CD44 /CD45 /CD105 抗人单克隆抗体，抗鼠 IG1、IG2，EDTA ( 美国 Sigma 公司) 碱性
磷酸酶检测试剂盒( 南京建成) ，培养板及培养瓶( Corning 公司) ，Exogen2000 超声波骨折治
疗仪( 北京诺亚) ，医用超声耦合剂 ( 上海洪康) 。
1. 3 脂肪间充质干细胞 ( ADSCs) 的分离培养脂肪组织剪成1 mm ×1 mm ×1 mm 左右小块。转移
至5 ml 的离心管中，加入5 倍体积的0. 1% Ⅰ 型胶原酶溶液，密封离心管。将离心管放入 37℃
的恒温振荡箱中，振荡消化45 ～60 min ，等体积DMEM － 低糖培养基中和，1 500 r/min 离心
10 min。弃上清，用 PBS 溶液离心漂洗沉淀两次。加入培养基重悬沉淀，200 目不锈钢筛网过
滤，1 500 r /min 离心5 min 。培养基重悬后，制成细胞悬液，然后细胞计数，按2 ×105 的密度
接种于 35 cm ×35 cm 的培养瓶内，置于37℃、5% CO2 的饱和湿度恒温培养箱中培养。于 12 h
后首次半量换液，之后每3 d 更换 1 次培养液。当细胞达到90% 融合时用约1 ml，0. 02%
EDTA + 0. 25% 胰蛋白酶的混合消化液( 1 1 ∶体积比) 37℃ 消化1 ～2 min，待细胞回缩成圆形
时加入培养基中和，并以 1 2 ∶或1 3∶传代培养。
摘要：
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低强度脉冲超声波对脂肪干细胞成骨分化效能的影响来源：学术堂作者：韩老师发布于：2014-08-21共4079字超声波是一种高频声波，也是机械能的一种形式，通过高频(1～12MHz)的压力波来传递能量，低强度脉冲超声波(LIPUS)一般指强度＜100mW/cm2的超声波。20世纪80年代初Duarte首先报道了LIPUS(强度为30mW/cm2)能加速动物骨折愈合，他们的研究进一步发现:低强度脉冲超声波可刺激骨折愈合，缩短愈合时间。根据Wolf“定律骨的形成与结构可随外力”的大小与方向而重建，骨骼的生理反应和愈合过程可受机械力学影响，超声产生的机械力刺激是否也能对骨骼的愈合产生影响逐渐受到人们的...
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