利用产妇分娩的胎盘脐带分离脐动脉内皮细胞

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来源：学术堂作者：韩老师

发布于：2014-08-21 共4131 字

血管内皮细胞具有产生和分泌多种生物活性物质、调节血管舒缩、抗凝血、维持血管内稳态等

多种生理功能。内皮细胞在血栓与止血、血管新生、炎症及免疫反应等一系列病理过程中也起

着关键的作用。随着人们对心脑血管疾病研究的深入，血管内皮细胞的许多功能被不断发现和

重新认识。由于高血压、动脉粥样硬化、心脑血管梗塞、肿瘤等疾病的增加，引起人们对血管

性疾病的病因、发病机制、发生发展过程等给予更多地关注。血管内皮细胞是研究血管功能和

心血管疾病重要的工具之一，而血管内皮细胞的分离和体外培养是研究其功能的基础。

血管内皮细胞通常从其形态学特征、CD31 表达等方面进行鉴定。目前，大多数学者选用脐静

脉分离内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)作为研究模型，国内外均未见

有分离人动脉内皮细胞方法的报道。因为具有活性的人源动脉十分稀有、不易获得且取材有一

定难度，所以对动脉系统特别是动脉内皮的研究多用大鼠、猪或牛的动脉细胞来替代，也有学

者使用人主动脉内皮细胞进行分析研究，多数为购入的商品化细胞，受人体材料来源的限制，

价格十分昂贵。灌流消化法是利用健康产妇正常分娩的胎盘脐带分离脐动脉内皮细胞( human

umbilical arterial endothelial cells，HUAEC) ，取材容易，方法可靠，操作简便，细胞成功传代

培养并鉴定。

1 材料和方法

1 ．1 材料

1 ．1 ．1 主要试剂和仪器 HepG2 人肝癌细胞为北京大学生命科学学院顾军教授惠赠，人胚肾

293A 细胞系为北京大学分子医学研究所朱晓君老师惠赠，M199 培养基、胎牛血清购自 Gibco

公司，1 型胶原酶购自 Worthington 公司，成纤维细胞生长因子购自 Peprotech 公司，肝素钠、

青霉素、链霉素和化学试剂购自 Sigma 公司，鼠尾胶原、Matrigel 胶、小鼠抗人 CD31 抗体购

自BD 公司，小鼠IgG、荧光标记的山羊抗小鼠IgG 抗体购自中山金桥公司，S100 倒置相差显

微镜购自日本 Nikon 公司，IX2-SP 荧光显微镜购自日本 Olympus 公司，小鼠灌胃针头购自苏

州市苏杭实验动物设备厂。

1 ．1 ．2 标本收集无菌条件下分离正常妊娠足月分娩的新生儿脐带( 北京海淀妇幼保健院产

科，孕妇产前检查 HBsAg、衣原体、人免疫缺陷病毒及梅毒均阴性) ，低温 4℃保存在含青、

链霉素的 PBS 中，6 h 内完成分离细胞的操作。本项研究经北京市海淀妇幼保健院科教科及北

京大学伦理委员会批准，产妇知情并志愿捐献。

1 ．2 方法

1 ．2 ．1 培养基及胶原酶溶液的制备M199 基础培养基，添加200 mL/L 胎牛血清、5 ng/mL

成纤维细胞生长因子( fibroblast growth factor，FGF) 、肝素钠、青霉素、链霉素等添加剂。配

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利用产妇分娩的胎盘脐带分离脐动脉内皮细胞来源：学术堂作者：韩老师发布于：2014-08-21共4131字血管内皮细胞具有产生和分泌多种生物活性物质、调节血管舒缩、抗凝血、维持血管内稳态等多种生理功能。内皮细胞在血栓与止血、血管新生、炎症及免疫反应等一系列病理过程中也起着关键的作用。随着人们对心脑血管疾病研究的深入，血管内皮细胞的许多功能被不断发现和重新认识。由于高血压、动脉粥样硬化、心脑血管梗塞、肿瘤等疾病的增加，引起人们对血管性疾病的病因、发病机制、发生发展过程等给予更多地关注。血管内皮细胞是研究血管功能和心血管疾病重要的工具之一，而血管内皮细胞的分离和体外培养是研究其功能的基础。血管内皮细...

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