胚胎大鼠皮质神经元培养中细胞消化及重悬改进

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胚胎大鼠皮质神经元培养中细胞消化及重悬改

进

来源：学术堂作者：韩老师

发布于：2016-03-04 共2657 字

随着现代神经科学及分子生物学的发展，在多个研究领域中原代大鼠大脑皮层神经细胞的培养

日益被广泛应用，不仅促进了对神经元结构和功能的进一步了解，还为大脑神经系统疾病发病

机制研究及药物的作用机制研究提供了一个平台。但在具体的实验操作中，胎鼠大脑皮层神经

元的分离和体外培养方面仍然存在一系列问题，如胎鼠胎龄难以控制，新生鼠进行神经元培养

时细胞存活率较低，细胞数量少、细胞损伤大及神经元纯度欠佳等，严重限制了后续研究的进

行。因此，本研究在参照相关文献[1-5]及反复实验的基础上，对细胞消化及重悬细胞等步骤进

行了适当改进，得到了较理想的培养结果。详情如下。

　 1　材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

将适龄的 Wistar 大鼠（吉大医学部实验动物中心提供）雌雄各一只合笼过夜，次日观察，以见

到阴栓开始将该雌鼠单独饲养并计算时间。以 24h 为1d,至第 16d 时可用于实验。

1.1.2 实验试剂及溶液的配制

多聚赖氨酸（分子量 70,000-150,000）购自美国 Sigma 公司。

L-谷氨酰胺（200mM 100X）、DMEM 培养基、胰蛋白酶购自美国 GIBCO 公司。细胞爬片

（24 孔）购自 alafa 公司。胎牛血清购自四季青公司。

B27、Neurobasal 神经元专用培养液、兔抗大鼠一抗、山羊抗兔荧光二抗购自美国 life 公司。

PBS 缓冲液 pH 调至 7.3-7.4,高压灭菌，4℃保存。PDL 包被液：用三蒸水配制 1mg/ml 的PDL

储液，微孔滤膜过滤除菌，4℃保存。含血清培养液：87%Neurobasal+2%B27（50×）+1%L-

glutamine（200mmol/L）+10%胎牛血清，混匀，4℃保存。无血清培养液：

97%Neurobasal+2%B27（50×）+1%L-glutamine（200mmol/L）,混匀，4℃保存备用。

1.1.3 培养板及爬片的预处理

用0.1mmol/ml 的多聚赖氨酸，分别包被 12 孔培养板及24 孔爬片（用于神经元鉴定）。37℃孵

育箱内放置过夜。多聚赖氨酸预处理24h 后将液体吸出，自然干燥后，无菌超纯水冲洗2遍，

置超净台内备用（避光保存）。

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摘要：

胚胎大鼠皮质神经元培养中细胞消化及重悬改进来源：学术堂作者：韩老师发布于：2016-03-04共2657字随着现代神经科学及分子生物学的发展，在多个研究领域中原代大鼠大脑皮层神经细胞的培养日益被广泛应用，不仅促进了对神经元结构和功能的进一步了解，还为大脑神经系统疾病发病机制研究及药物的作用机制研究提供了一个平台。但在具体的实验操作中，胎鼠大脑皮层神经元的分离和体外培养方面仍然存在一系列问题，如胎鼠胎龄难以控制，新生鼠进行神经元培养时细胞存活率较低，细胞数量少、细胞损伤大及神经元纯度欠佳等，严重限制了后续研究的进行。因此，本研究在参照相关文献[1-5]及反复实验的基础上，对细胞消化及重悬细胞等步...

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