神经干细胞增殖中非必需氨基酸与β-巯基乙醇的作用研究

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神经干细胞增殖中非必需氨基酸与 β-巯基乙醇

的作用研究

来源：学术堂作者：周老师

发布于：2016-03-04 共3397 字

神经干细胞（ NSCs ）广泛存在于胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统，是一类具有分裂潜能和

自我更新能力的前体细胞，它可以通过对称分裂和不对称分裂方式进行自我更新并产生神经组

织的各类细胞，包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等[1].NSCs 的发现为神经系统变

性、损伤性疾病的修复、治疗开辟了新途径。已有研究表明，非必需氨基酸（ NEAA ）和 β-

巯基乙醇能够促进小鼠胚胎干细胞向 NSCs 转化[2], 但目前尚无 NEAA 和β- 巯基乙醇对孕 14. 5

d 来源胎鼠的 NSCs 作用的相关报道。本文进行了相关探讨。

　　 1　材料与方法。

1. 1 材料实验动物：孕 14. 5 d 雌鼠购于昆明医科大学实验动物中心，合格证号：

SCXY （滇） -2014004. 试剂：达尔伯克改良伊格尔培养基-F12 营养混合物（ DMEM-F12 ）培

养基，神经基础培养基（ NeuronalBase ）,NEAA,β- 巯基乙醇，青 / 链霉素（ P / S ）,谷氨酸混

合物，0.05%胰蛋白酶- 乙二胺四乙酸（ Trypsin-ED-TA ）, 胎牛血清（ FBS ）,牛血清蛋白（

BSA ）均购自 Gib-co 公司。B27, 噻唑蓝（ MTT ）购自 Sigma 公司。表皮细胞生长因子（

EGF ）, 碱性纤维生长因子（ bFGF ）, 巢蛋白（ Nestin ）, Ⅲ 神经元类 β 微管蛋白（ TUJ-1 ）,胶

质纤维酸性蛋白（ GFAP ）购自 Millipore 公司。PCR 逆转录试剂盒购自宝生物工程有限公

司，其他 RT-PCR 试剂购自 ABI 公司。甘油醛-3- 磷酸脱氢酶（ GAPDH）及含半胱氨酸的天冬

氨酸蛋白水解酶-3 （Caspase-3 ）基因引物由 Invitrogen 公司合成。GAPDH: F:5'-GCT-

TCGGCAGCACATATACTAAAAT-3'; R: 5'-TTGGCTC-CACCCTTCAAGTG-3'. Caspase-3: F: 5'-

ACCGAT-GTCGATGCAGCTAA-3'; R: 5'-GGTGCGGTAGAGTA-AGCATA-3'.

1. 2 培养基的配制 NSCs 原代培养基：向 DMEM /F12 培养基内加入 2 mmol / L Gluta MAX,2

mmol / LP / S,4 mmol / L B27,20 ng / mL EGF 和20 ng / mLbFGF.NSCs 传代培养不含 P / S,其余

与原代培养基相同。NSCs 贴壁培养基：向 DMEM/F12 培养基内加入 50% Neuronal Base、1%

BSA、2 mmol/L GlutaMAX、4 mmol / L B27、20 ng / mL EGF 和20 ng / mLbFGF.NSCs 分化培

养基：向 DMEM / F12 培养基内加入 50% Neuronal Base、0. 5 % FBS、2 mmol/L Glu-ta

MAX、4 mmol / L B27.

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摘要：

神经干细胞增殖中非必需氨基酸与β-巯基乙醇的作用研究来源：学术堂作者：周老师发布于：2016-03-04共3397字神经干细胞（NSCs）广泛存在于胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统，是一类具有分裂潜能和自我更新能力的前体细胞，它可以通过对称分裂和不对称分裂方式进行自我更新并产生神经组织的各类细胞，包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等[1].NSCs的发现为神经系统变性、损伤性疾病的修复、治疗开辟了新途径。已有研究表明，非必需氨基酸（NEAA）和β-巯基乙醇能够促进小鼠胚胎干细胞向NSCs转化[2],但目前尚无NEAA和β-巯基乙醇对孕14.5d来源胎鼠的NSCs作用的相关报道。本文进行了相关...

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