聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染色与脱色方法

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聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染色与脱色方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、分析蛋白质常用的方法。在蛋白质组学试验中，蛋白质经聚丙烯

酰胺凝胶电泳后的染色是十分重要的环节。电泳后的常规染色方法已有很多，目前一般采用的

染色、脱色方法是用甲醇-醋酸〔1〕.但在学生的实验中，脱色液用量相当大，且脱色时间长

〔2〕,不但试剂成本耗费比较高、实验时间长，而且甲醇的毒性有害健康〔3〕.为此，本文用乙醇

代替甲醛，用 10% 的三氯醋酸代替高浓度的醋酸配制染色、脱色液，并用微波炉加热染色、

脱色的方法〔4,5〕,建立了一种成本低、无毒性的快速染色、脱色方法。

1 材料与方法

1. 1 材料

1. 1. 1 主要试剂和仪器丙烯酰铵、N,N'-甲叉双丙烯酰铵、过硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷

（Tris ）、三羟甲基甘氨酸（Tricine ）、盐酸、氢氧化钠、四甲基乙二胺（TEMED ）、核黄

素、甘氨酸、蔗糖、溴酚蓝、三氯乙酸（TCA ）、考马斯亮蓝 G250、95% 乙醇（均为上海生

工生物工程有限责任公司） . 电泳采用 MV-Ⅱ 型双垂直板微型电泳系统。

1. 1. 2 染色液、脱色液的配制见表 1.

1. 2 实验方法 1. 2. 1 制胶取小烧杯，根据预定胶浓度，吸取定量的凝胶应用液，依次加入分离

胶应用液、水、TEMED, 慢速搅拌，并在真空干燥器中抽气 3 min.加入过硫酸铵轻轻搅拌后，

立即将胶液沿玻壁注入倾斜一定角度的垂直板型凝胶玻璃板模具中，至距上沿约 3 cm 处。然

后用滴管沿玻璃板内壁缓缓注入一层蒸馏水隔离空气，室温垂直放置，使凝胶液聚合。30 ~40

min 后分离胶完全聚合，倾出分离胶上的覆盖层液体，用滤纸条吸干残留水分。注入浓缩胶

（小心不要产生气泡） , 将胶液加到距玻璃顶端 1 cm 处插入样品模具梳子，放在紫外灯下，使

凝胶聚合。

胶凝后，去掉硅胶条。将凝胶板安装在微型电泳槽上。在内外缓冲液槽中均加入电极缓冲液，

小心拔出样品槽模具，加样。

1. 2. 3 加样和电泳在样品槽内用微量注射器依次加入 20 ~30 nm 样品溶液，电泳的条件为浓缩

胶中的电压120 V,待样品进入分离胶后，改为150 V,当溴酚蓝指示剂距玻璃板底部 1 cm 时，停

止电泳。

1. 2. 4 固定和染色方法 1: 将电泳完的凝胶放入用考马斯亮蓝 R-250、甲醇、冰醋酸配制的染色

液中，然后放在摇床上摇动染色，15 min 后取出凝胶，用蒸馏水冲洗3 次，再加入 100 ml 的

脱色液，在摇床上脱色，20 min 后倒掉变蓝脱色液，然后用蒸馏水冲洗3 次，弃去变蓝的蒸馏

水，再倒入100 ml 脱色液重复上面操作 3 次。方法 2: 将电泳完的凝胶放入盛有100 ml 的用考

马斯亮蓝 R-250、10% 三氯醋酸、乙醇配制的染色液的塑料盘中，盖子扣严，在微波炉中用高

火照射 10 s 染色，然后用蒸馏水反复冲洗3 次。再将凝胶放入 100 ml 脱色液中，高火档照射

20 s, 然后倒掉脱色液，用蒸馏水冲洗，弃去变蓝的蒸馏水。再加入新鲜脱色液再照射 20 s, 重复

3 次，凝胶体积会逐渐缩小，将其用蒸馏水反复冲洗，恢复到原来的体积。凝胶先出现紫色条

带，然后逐渐变成较清晰的蓝色条带。

2 结果。

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摘要：

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染色与脱色方法聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、分析蛋白质常用的方法。在蛋白质组学试验中，蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的染色是十分重要的环节。电泳后的常规染色方法已有很多，目前一般采用的染色、脱色方法是用甲醇-醋酸〔1〕.但在学生的实验中，脱色液用量相当大，且脱色时间长〔2〕,不但试剂成本耗费比较高、实验时间长，而且甲醇的毒性有害健康〔3〕.为此，本文用乙醇代替甲醛，用10%的三氯醋酸代替高浓度的醋酸配制染色、脱色液，并用微波炉加热染色、脱色的方法〔4,5〕,建立了一种成本低、无毒性的快速染色、脱色方法。1材料与方法1.1材料1.1.1主要试剂和仪器丙烯酰铵、N,N'-甲叉双丙烯...

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