硕士毕业论文Chelex-100模板检测H19印迹位点遗传多态性及其在山西汉族人群中的分布
硕士毕业论文 Chelex-100 模板检测 H19 印迹
位点遗传多态性及其在山西汉族人群中的分布
论文概述：
本文是医学硕士论文， Chelex-100 法提取的 DNA 能成为甲基化敏感限制性内切酶 Hha I 酶切
底物应用于印记基因 H19 上游区域差异甲基化的检测，Hhal 消化后 PCR 扩增两条条带光密度
比值在 3.63—4.13 区间时可
论文正文：
前言
印记基因的分离、鉴定和作用机制研究表明，许多与印记基因和印记控制中心相邻的序列都有
脱氧核糖核酸甲基化修饰和差异甲基化序列，来自亲本的等位基因甲基化水平在差异甲基化区
域不同。例如，当印记基因来自亲本来源时，亲本等位基因高度甲基化，而亲本等位基因未甲
基化或低甲基化，从而使转录因子或其他转录相关蛋白与其结合能力不同，并进一步使亲本等
位基因的表达能力不同，即印记产生，而亲本印记基因正好相反。
……
材料和方法
1材料
脱氧核糖核酸扩增仪(基因扩增仪 9700；ABI；美国)
实时聚合酶链反应系统 Mx3000P 地层基因；美国
紫外可见分光光度计(Ultrospec 4300pro 通用电气医疗；(英国)
洁净工作台(FLC-3 型；哈尔滨东联公司；哈尔滨)
超纯水装置(SZ-93；上海亚龙生化仪器厂；上海)
旋转式搅拌机(QL-901；麒麟医疗器械厂；江苏)
便携式压力蒸汽灭菌器(GMSX-280；北京永光医疗器械厂；北京)
精密电子天平(OHAUS)台式离心机(TGL-16B；上海安亭科学仪器厂；上海)
恒温水浴箱。(CS501，；上海卓越仪器有限公司
高速低温台式离心机(2-16K；西格玛；美国)
2方法
根据相关文献报道[7-10]，人 H19 基因是位于染色体 llpl5.5 区域印记基因簇中的亲本印记基
因，即亲本等位基因甲基化，不能被甲基化敏感限制性酶切割，亲本等位基因未甲基化，可以
被甲基化敏感限制性酶切割。这个问题在文献中有报道吗？研究了亲本印迹基因 H19 的上游区
域。引物对 AB 和CD 从文献中获得。引物对 AB 含有 4个哈尔切割位点和 VNTR 位点，扩增
长度约为 1.7kb，引物对 CD 只含有 VNTR 位点，扩增长度约为 500bp。实时定量聚合酶链反应
引物对 EF 来自我们的实验室，扩增长度为 147bp。引物序列如表 1所示。(1)破坏红细胞。在
400 微升抗凝血剂中加入 1微升和50 微升 P40。摇动钩子后，以 13000 转/分钟离心 5分钟，弃
去上清液，用 TKM1 液体悬浮细胞沉淀，钩子混合后离心，重复几次，直到上清液变成无色。
(2)白细胞的破坏:将处理过的样品与TKI 500 11 和20g/mlpk3nL 混合，并在 56℃水浴中孵育-5
小时，直到液体完全透明。(3)-亚等容苯，一次苯/氯仿，一次氯仿萃取。每次提取都需要仔细
彻底地混合水相和油相，以 13000 转/分钟的速度离心 5分钟，并将水相尽可能转移到另一个离
心管中。(4)向上清液中加入 2.5 倍体积的冰无水乙醇和1/10 体积的3M 乙酸钠，混合并混合，
在-2℃下沉淀 1小时，14，000 转/分钟20 分钟，弃去上清液，加入 3倍体积的75%无水乙
醇，14，000 转/分钟20 分钟，弃去上清液，空风干，加入适量去离子水溶解，并在-20℃下储
存备用。
结果1……2
1。采用Chelex-100 提取法提取的脱氧核糖核酸作为 Hha 酶消化底物，检测印迹基因 H19 上游
……区域的差异甲基化。结果 山西汉族人群印记基因 H19 上游区域 YNTR 位点 12
br/] 2 多态性15
探讨........18
摘要：
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硕士毕业论文Chelex-100模板检测H19印迹位点遗传多态性及其在山西汉族人群中的分布论文概述：本文是医学硕士论文，Chelex-100法提取的DNA能成为甲基化敏感限制性内切酶HhaI酶切底物应用于印记基因H19上游区域差异甲基化的检测，Hhal消化后PCR扩增两条条带光密度比值在3.63—4.13区间时可论文正文：前言印记基因的分离、鉴定和作用机制研究表明，许多与印记基因和印记控制中心相邻的序列都有脱氧核糖核酸甲基化修饰和差异甲基化序列，来自亲本的等位基因甲基化水平在差异甲基化区域不同。例如，当印记基因来自亲本来源时，亲本等位基因高度甲基化，而亲本等位基因未甲基化或低甲基化，从而使转录...
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作者：闻远设计
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时间：2023-08-30
